腸道柔嫩梭菌與牙周健康相關(guān)性研究.pdf

1、背景:
　　 牙周炎是一種常見的口腔慢性感染性疾病，其發(fā)生發(fā)展受多種因素的影響。流行病學(xué)研究表明，全球約有超過三分之二的人患有不同形式的牙周疾病，而患有中度和重度牙周炎的成人患者分別約為44％～57％和10％。雖然牙周致病菌是牙周炎發(fā)生的始動(dòng)因子，但其疾病進(jìn)程最終由宿主的免疫反應(yīng)決定。而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatoryTcells，Treg)作為機(jī)體主要的免疫抑制和調(diào)節(jié)細(xì)胞，在牙周炎的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著不可替代的作用。
　

2、　 2型糖尿病是常見的內(nèi)分泌代謝性疾病，被認(rèn)為是牙周病的危險(xiǎn)因素之一。臨床對照研究結(jié)果表明，在局部刺激因素相似的情況下，2型糖尿病患者的牙周炎發(fā)生率及嚴(yán)重程度均大于無糖尿病者。目前大量研究認(rèn)為，2型糖尿病是一種與機(jī)體免疫功能紊亂有關(guān)的低度慢性炎癥。隨著全球生活方式的改變和老齡化進(jìn)程的加速，牙周炎和2型糖尿病的患病率正在呈快速上升趨勢，且二者相互影響已成為世界范圍內(nèi)的公共健康問題。因此，探討防治該類炎癥性疾病的新方法具有重要的科學(xué)意義和

3、深遠(yuǎn)的社會(huì)意義。
　　 近來，有研究發(fā)現(xiàn)腸道菌群柔嫩梭菌（Clostridiumleptumsubgroup，C.leptum）能促進(jìn)Treg細(xì)胞的產(chǎn)生，并通過增殖和活化Treg細(xì)胞及分泌一些相關(guān)抗炎細(xì)胞因子（如IL-10）來抑制自身損傷性炎癥反應(yīng)，從而減輕對機(jī)體的免疫病理損傷。最近的研究發(fā)現(xiàn)，給予成年小鼠口服C.leptum可有效誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的增殖和活化，并顯著減輕OVA致敏小鼠氣道內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤及炎性細(xì)胞因子的分泌。上述

4、研究結(jié)果提示C.leptum可能參與了某些炎性疾病的發(fā)展過程并在一定程度上減輕機(jī)體的炎癥反應(yīng)，這將對常見的口腔慢性炎性疾病牙周炎的科學(xué)研究和臨床治療產(chǎn)生重要的指導(dǎo)意義。
　　 雖然C.leptum在炎性疾病中的作用愈來愈受到國內(nèi)外專家及學(xué)者的關(guān)注，但是目前有關(guān)該菌群與牙周組織健康狀況之間的研究尚未見報(bào)道。C.leptum是否與牙周組織局部炎癥狀態(tài)有關(guān)，是否能發(fā)揮其抗炎特性減輕牙周組織的炎癥破壞至今尚不清楚。
　　 目的:

5、
　　 應(yīng)用Real-timePCR方法對糞便中C.leptum進(jìn)行定量檢測，初步探討腸道C.leptum與牙周組織炎癥狀態(tài)之間的關(guān)系，為牙周炎的臨床治療提供新的思路。
　　 方法:
　　 選取慢性（中重度）牙周炎患者（CP組）、2型糖尿病患者（DM組）、伴2型糖尿病的慢性（中重度）牙周炎患者[(DM+CP)組]及健康對照者（HC組）各20例為研究對象，每位受試者均進(jìn)行問卷調(diào)查和牙周臨床檢查，并收集糞便標(biāo)本。根據(jù)

6、C.leptum16SrRNA序列設(shè)計(jì)特異性引物，以常規(guī)PCR產(chǎn)物經(jīng)克隆后的質(zhì)粒DNA為標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)梯度稀釋后制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。待測糞便標(biāo)本提取細(xì)菌基因組DNA，應(yīng)用SYBRGreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對標(biāo)本中的C.leptum進(jìn)行定量分析。采用SPSS17.0軟件對所得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，各組間臨床指標(biāo)PD、AL和基因拷貝數(shù)的比較采用成組設(shè)計(jì)資料的t檢驗(yàn)，BOP陽性率比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.

7、05則認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組PD、AL和BOP陽性率比較:(DM+CP)組的PD和AL值均顯著大于HC組、CP組和DM組(P＜0.05);(DM+CP)組的BOP陽性率明顯高于HC組、CP組和DM組（P＜0.05）。
　　 2.各組標(biāo)本每克濕便中C.leptum的16SrRNA基因拷貝數(shù)的對數(shù)值(logcopies/g)分別為:HC組（7.09±0.17），CP組（6.31±0.58

8、），DM組（5.79±0.52），(DM+CP)組（5.41±0.29）。CP組、DM組及(DM+CP)組C.leptum基因拷貝數(shù)明顯低于HC組（P＜0.01）。(DM+CP)組C.leptum基因拷貝數(shù)明顯低于CP組和DM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 腸道菌群C.leptum的數(shù)目與牙周組織局部炎癥狀態(tài)之間有一定的關(guān)系。與HC組、CP組和DM組相比，C.leptum數(shù)目最少的(DM+CP