癌痛消顆粒體外抑瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:癌痛消顆粒是導(dǎo)師韋艾凌教授長期治療肝癌的專病特色方。前期臨床與實(shí)驗(yàn)研究顯示其有抗原發(fā)性肝癌的作用。本實(shí)驗(yàn)研究以人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、Bel-7404瘤株為研究對(duì)象，采用含藥血清藥理法、流式細(xì)胞術(shù)等現(xiàn)代科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究手段，分析癌痛消顆粒在體外對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制作用，從細(xì)胞周期調(diào)控和增殖與凋亡方面探討其體外抗腫瘤的作用機(jī)制。
　　 方法:1、體外直接抑瘤法，癌痛消顆粒作用于人肝癌SMMC-7721細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞Bel-7

2、404細(xì)胞:(1)MTT法檢測(cè)癌痛消顆粒及氟尿嘧啶對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、Bel-7404的影響。(2)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定藥物作用過后的細(xì)胞周期。2、采用血清藥理學(xué)法制備空白血清、癌痛消顆粒含藥血清、CTX含藥血清，作用于人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、Bel-7404:(1)MTT法檢測(cè)癌痛消顆粒含藥血清及CTX含藥血清對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞Bel-7404細(xì)胞的影響。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)含藥血清作用過后細(xì)胞的凋

3、亡率。
　　 結(jié)果:直接抑瘤法:作用于人肝癌細(xì)胞Bel-7404時(shí):①5-Fu組與空白組比較差異有非常顯著性意義(P＜0.01)，說明5-Fu在對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7404作用48h后具有抑制增殖的作用;②癌痛消顆粒的低劑量組(5mg/mL)與空白組比較差異無顯著性意義(P＞0.05);中低、中、中高、高劑量組(25mg/mL，50mg/mL，75mg/mL，100mg/mL)與空白組比較差異有非常顯著性意義(P均＜0.01)，

4、顯示中低、中、中高、高劑量組癌痛消顆粒在對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7404作用48h后具有抑制增殖的作用。③癌痛消顆粒各劑量組間比較差異均有顯著性意義(P均＜0.05)，呈現(xiàn)濃度越高作用效果更好的量效關(guān)系。作用于人肝癌細(xì)胞SMMC-7721時(shí):①5-Fu組與空白組比較差異有非常顯著性意義(P＜0.01)，顯示5-Fu在對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721作用48h后具有抑制增殖的作用;②癌痛消顆粒的低劑量組(5mg/mL)與空白組比較差異無顯著性意

5、義(P＞0.05);中低、中、中高、高劑量組(25mg/mL，50mg/mL，75mg/mL，100mg/mL)與空白組比較差異有非常顯著性意義(P均＜0.01)，顯示中低、中、中高、高劑量組癌痛消顆粒在對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721作用48h后具有抑制增殖的作用;③癌痛消顆粒各劑量組間比較差異均有顯著性意義(P均＜0.05)，呈現(xiàn)濃度越高作用效果更好的量效關(guān)系。④癌痛消顆粒高濃度(100mg/mL)與5-Fu組比較差異無顯著性意義(P

6、＞0.05)，顯示癌痛消顆粒高濃度(100mg/mL)與5-Fu人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的抑制增殖作用相似。
　　 細(xì)胞周期調(diào)控:癌痛消5個(gè)劑量組均可以引起人肝癌細(xì)胞SMMC-7721及Bel7404G0-G1期比例增加，癌痛消中低、中、中高、高劑量組(25mg/mL，50mg/mL，75mg/mL，100mg/mL)與空白對(duì)照組相比差異均有非常顯著性意義(P均＜0.01)，癌痛消低劑量組(5mg/ml)與空白對(duì)照組相比差異

7、有顯著性意義(P＜0.05)，癌痛消顆粒各劑量組間比較差異均有顯著性意義(P均＜0.05)，呈現(xiàn)濃度越高作用效果更好的量效關(guān)系(P均＜0.05)。
　　 含藥血清法:含藥血清作用于人肝癌細(xì)胞Bel-7404時(shí)，①癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為10％、20％時(shí)與空白組比較差異均無顯著性意義(P均＞0.05);顯示癌痛消癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為10％、20％時(shí)對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7404無抑制增殖作用。②隨著含藥血清濃度增加，

8、癌癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為30％、40％、50％時(shí)與空白組比較差異均有顯著性意義(P均＜0.05)，癌痛消顆粒中劑量組中含藥血清濃度為10％、20％、30％、40％、50％、癌痛消顆粒高劑量組中含藥血清濃度為10％、20％、30％、40％、50％與空白組比較差異均有顯著性意義(P均＜0.05)，顯示癌癌痛消顆粒低劑量組中含藥血清濃度為30％、40％、50％、癌痛消顆粒中劑量組中含藥血清濃度為10％、20％、30％、40％、50％、

9、癌痛消顆粒高劑量組中含藥血清濃度為10％、20％、30％、40％、50％對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7404有抑制增殖作用。③CTX組與空白組比較差異有非常顯著性意義(P＜0.01)。顯示CTX組對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7404有抑制增殖作用。癌痛消顆粒中劑量組中含藥血清濃度為40％、50％、癌痛消顆粒高劑量組中含藥血清濃度為40％、50％與CTX含藥血清組比較差異無顯著性意義(P均＞0.05)。顯示癌痛消顆粒中劑量組中含藥血清濃度為40％、50％

10、、癌痛消顆粒高劑量組中含藥血清濃度為40％、50％與CTX含藥血清組對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7404的抑制增殖作用相似。癌痛消顆粒含藥血清作用于人肝癌細(xì)胞SMMC-7721時(shí)，①癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為10％時(shí)與空白組比較差異無顯著性意義(P＞0.05);顯示癌痛消癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為10％時(shí)對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7404無抑制增殖作用。②隨著含藥血清濃度增加，癌癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為20％、30％、40％、50％時(shí)與

11、空白組比較差異均有顯著性意義(P均＜0.05)，癌痛消顆粒中劑量組中含藥血清濃度為10％、20％、30％、40％、50％、癌痛消顆粒高劑量組中含藥血清濃度為10％、20％、30％、40％、50％與空白組比較差異均有顯著性意義(P均＜0.05)。顯示癌癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為20％、30％、40％、50％、癌痛消顆粒中劑量組中含藥血清濃度為10％、20％、30％、40％、50％、癌痛消顆粒高劑量組中含藥血清濃度為10％、20％、30

12、％、40％、50％對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721有抑制增殖作用。③CTX含藥血清組與空白組比較差異有非常顯著性意義(P＜0.01)，顯示CTX含藥血清組對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721有抑制增殖作用。癌痛消顆粒中劑量組中含藥血清濃度為50％、癌痛消顆粒高劑量組中含藥血清濃度為50％與CTX含藥血清組比較差異無顯著性意義(P均＞0.05)。顯示癌痛消顆粒中劑量組中含藥血清濃度為50％、癌痛消顆粒高劑量組中含藥血清濃度為50％與CTX含藥血清

13、對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的抑制增殖作用相似。
　　 細(xì)胞凋亡率檢測(cè):癌痛消顆粒含藥血清作用于人肝癌細(xì)胞Bel-7404時(shí)，癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為10％、20％時(shí)、癌痛消中劑量組中合藥血清濃度為10％時(shí)、癌痛消高劑量組中含藥血清濃度為10％時(shí)，與空白組比較差異均無顯著性意義(P均＞0.05)，顯示癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為10％、20％時(shí)、癌痛消中劑量組中含藥血清濃度為10％時(shí)、癌痛消高劑量組中含藥血清濃度為10

14、％時(shí)沒有促進(jìn)人肝癌細(xì)胞Bel-7404凋亡的作用;隨著含藥血清濃度增加，癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為30％、40％、50％、中劑量組中含藥血清濃度為20％、30％、40％、50％、高劑量組中含藥血清濃度為20％、30％、40％、50％與空白組比較差異均有顯著性意義(P均＜0.05)，顯示癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為30％、40％、50％、中劑量組中含藥血清濃度為20％、30％、40％、50％、高劑量組中含藥血清濃度為20％、30％、

15、40％、50％有促進(jìn)人肝癌細(xì)胞Bel-7404凋亡的作用。癌痛消顆粒含藥血清作用于人肝癌細(xì)胞SMMC-7721時(shí)，癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為10％、20％時(shí)與空白組比較比較差異均無顯著性意義(P＞0.05)，顯示癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為10％、20％時(shí)對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721沒有促進(jìn)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡的作用;隨著含藥血清濃度增加，癌痛消低劑量組中含藥血清濃度為30％、40％、50％、中劑量組中含藥血清濃度為

16、10％、20％、30％、40％、50％、高劑量組中含藥血清濃度為10％、20％、30％、40％、50％與空白組比較差異均有顯著性意義(P均＜0.05)，顯示癌痛消顆粒低劑量組中含藥血清濃度為30％、40％、50％、中劑量組中含藥血清濃度為10％、20％、30％、40％、50％、高劑量組中含藥血清濃度為10％、20％、30％、40％、50％時(shí)有促進(jìn)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡的作用。
　　 結(jié)論:癌痛消顆粒在體外對(duì)肝癌細(xì)胞有抑