中國紅豆杉MYB類轉(zhuǎn)錄因子的克隆及功能研究.pdf

1、MYB轉(zhuǎn)錄因子家族是植物中成員最多的蛋白超家族之一，廣泛參與調(diào)控植物的次生代謝及細(xì)胞形態(tài)發(fā)生等生命活動。目前，尚無關(guān)于紅豆杉MYB轉(zhuǎn)錄因子的研究報道。紅豆杉細(xì)胞低產(chǎn)紫杉醇的問題遲遲不能解決更增進(jìn)了研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控的需要。本文基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫從中國紅豆杉克隆了6個MYB轉(zhuǎn)錄因子，并結(jié)合序列分析和超表達(dá)法對其功能展開研究，取得了如下結(jié)果：
　　1）生物信息學(xué)分析顯示6個轉(zhuǎn)錄因子皆能定位在細(xì)胞核中且不穩(wěn)定存在；酵母激活和洋蔥表皮細(xì)胞亞細(xì)胞定

2、位實驗證實Tc2RMYB2具有轉(zhuǎn)錄激活活性并且定位在細(xì)胞核中；聚類分析將TcGARP2歸屬于一個尚未定義的GARP亞類，同時在5個R2R3MYB轉(zhuǎn)錄因子中發(fā)現(xiàn)了三個新的保守域FIDFLGVGA domain、PTSLSLSLPG domain和MREMIAKEV domain，F(xiàn)IDFLGVGA domain可能在MYB轉(zhuǎn)錄因子的演化上參與位置決定。
　　2）超表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合半定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)：Tc2RMYB4~6對查爾酮異構(gòu)

3、酶（CHI）的表達(dá)無影響，過量的Tc2RMYB3會使CHI輕微下調(diào)，這應(yīng)該與它們都不具有典型的類黃酮上調(diào)結(jié)構(gòu)域SG7及SG7-2有關(guān)。紫杉醇合成酶DBAT和T13αH啟動子富含MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合元件，但這兩個酶在Tc2RMYB3~6超表達(dá)后并沒有隨之增強(qiáng)表達(dá)。說明MYB轉(zhuǎn)錄因子可能通過間接或與其他蛋白協(xié)同的方式來參與調(diào)控。
　　3）通過同源比對法從轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫篩選并克隆到一個JAZ蛋白 TcJAZ3。Tc2RMYB4及其R2R3d