葡寡糖的衍生化及吸收研究.pdf

1、目的：
　　糖類是自然界中廣泛分布的一類重要的有機化合物，具有多種生物學效應，與免疫、炎癥、腫瘤等密切相關。糖類結構復雜，既無紫外吸收又無熒光特性，檢測非常困難，極大地限制了糖類物質的研究與進展，因此糖類物質的藥代動力學研究一直難有突破。盡管如此，目前已有多種口服糖類藥物面市，但是多糖類藥物口服能否吸收研究，仍然在爭論之中，主要因為研究方法仍將多糖降解為單糖，而沒有考慮多糖的特性。本研究擬通過將寡糖衍生化，探討寡糖以原型吸收入血的

2、特點，為糖類的藥代動力學研究提供技術方法。
　　方法：
　　1．采用三種紫外衍生化試劑1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)、3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)和對氨基苯甲酸乙酯(ABEE)對葡寡糖混合物(maltodextrin)中聚合度1～10的單糖和寡糖進行定量標記，激光解析電離質譜(ESI-MS)分析標記配比。同時采用異硫氰酸熒光素(FITC)標記maltodextrin，以熒光分光光度計檢測熒光強度。
　　

3、2．建立在體單向腸灌流和體外Caco-2單層細胞模型中衍生化葡寡糖含量的HPLC檢測方法，選取三種標記物中方法簡便、穩(wěn)定性、重復性相對較優(yōu)者，并對其色譜條件進行方法學考察。
　　3．采用在體單向腸灌流以及體外Caco-2單層細胞模型，觀察maltodextrin衍生化產物的定量吸收特性。
　　結果：
　　1．獲得了PMP、AEC、ABEE以及FITC標記的maltodextrin。ESI-MS分析顯示PMP、AEC、A

4、BEE三種衍生化試劑均可與maltodextrin中聚合度1～10的單糖和寡糖反應，三者與糖分子分別以2：1、1：1和1：1比例定量結合。FITC標記的maltodextrin經熒光分光光度計檢測，靈敏度高，但是無法確定FITC標記糖分子的比例關系，熒光分光光度計法也不能分離不同聚合度的寡糖，故不適用于本研究后續(xù)體內、外吸收實驗。
　　2．采用HPLC對三種紫外衍生化試劑標記的maltodextrin進行檢測，結果顯示，malto

5、dextrin的PMP衍生化物(PM)分離效果好，靈敏度高，穩(wěn)定性良好。其色譜條件為，色譜柱：250×4.60mm，5μmphenomenexC18；流動相：100mMNaAc/乙腈(梯度)；流速：1.0mL·min-1；紫外檢測波長245nm；進樣量：20μL。Maltodextrin的AEC、ABEE衍生化產物，與PMP衍生化物相比較，色譜條件復雜、耗時長，且分離效果不及后者，因此采用maltodextrin的PMP衍生物進行體內、

6、外吸收研究。
　　3．在體腸灌流模型表明，灌流給予1mg·mL-1maltodextrin的PMP衍生化物后，經30min左右可檢測到單糖、雙糖和三糖吸收入血。流出液中雙糖濃度出現(xiàn)升高的時間與血中雙糖濃度達最大值所對應的時間大體一致，而流出液中其他聚合度糖濃度均呈下降趨勢。流出液中雙糖濃度的升高，提示聚合度較高的寡糖可能在腸道被降解后吸收入血。體外實驗表明，Caco-2單層細胞對寡糖具有轉運功能，檢測到六種聚合度的糖可透過細胞層，