人骨肉瘤原發(fā)耐藥伴高轉(zhuǎn)移原代細(xì)胞系的初步建立.pdf

1、目的：建立人骨肉瘤原代耐藥細(xì)胞系及移植性人骨肉瘤裸鼠轉(zhuǎn)移模型，為進(jìn)一步闡明原發(fā)耐藥骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制提供理想平臺(tái)。 方法：采用原代組織塊培養(yǎng)法對(duì)術(shù)中取得的骨肉瘤手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)，在體外傳代至鏡下細(xì)胞形態(tài)均一、性狀穩(wěn)定后初步完成建系。測(cè)定原代細(xì)胞系的細(xì)胞周期、生長(zhǎng)曲線、分裂指數(shù)、貼壁率、倍增時(shí)間，并行異種移植；測(cè)定該原代細(xì)胞株對(duì)常用化療藥物的半數(shù)抑制濃度并與MG-63、Saos-2及本科實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的人成骨肉瘤耐氨甲喋呤

2、細(xì)胞系Saos-2/MTX 4.4對(duì)比以判斷其耐藥程度；觀察裸鼠移植瘤模型發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的機(jī)率以判斷該細(xì)胞系的轉(zhuǎn)移能力，對(duì)采用異種移植法所產(chǎn)生的移植瘤進(jìn)行免疫組化測(cè)定。 結(jié)果：經(jīng)過8個(gè)月的體外培養(yǎng)，建立人成骨肉瘤原代細(xì)胞系GSF-0806，至09年4月，共在體外培養(yǎng)90代，期間鏡下細(xì)胞性狀保持穩(wěn)定，無支原體、原蟲、細(xì)菌、真菌及其他細(xì)胞系污染，生物學(xué)表現(xiàn)符合骨肉瘤細(xì)胞的特征；倍增時(shí)間36.7h；細(xì)胞周期測(cè)定G1期為61.3％、G2期

3、為22.0％、S期為16.7％；該細(xì)胞株分裂指數(shù)為20.36％；4小時(shí)后貼壁率為35％，8小時(shí)后貼壁率為58％；以MTT法測(cè)定IC50顯示與Saos-2、MG-63、人成骨肉瘤耐氨甲喋呤細(xì)胞系Saos-2/MTX 4.4相比該細(xì)胞系對(duì)多種化療藥物表現(xiàn)出高度耐藥。采用細(xì)胞異種移植或瘤塊異種移植成瘤率均達(dá)100％，其異種移植所產(chǎn)生的移植瘤病理證實(shí)為骨肉瘤，相關(guān)免疫組化指標(biāo)與原發(fā)腫瘤保持一致。行皮下異種移植后所種植的裸鼠中有半數(shù)以上出現(xiàn)了肺、