三萜類醌甲基化合物雷公藤紅素的HPLC-UV和UPLC-Q-TOF分析方法及其大鼠體內(nèi)代謝的研究.pdf

1、雷公藤紅素（Celastrol/Tripterine），別名南蛇藤素，從自衛(wèi)矛科植物雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f.）中提取所得，具有抗炎、免疫抑制、抗癌等多種生物活性，國內(nèi)外對其藥理作用研究非常之多。本文采用高效液相色譜（high performance liquid chromatogrephy, HPLC）和超高效液相色譜-四級桿-飛行時間質(zhì)譜（ultra-performance liquid

2、 chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry, UPLC-Q-TOF-MS），對大鼠尾靜脈注射和灌胃給藥后血漿中雷公藤紅素的濃度進(jìn)行測定，并研究了雷公藤紅素在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)情況，同時對藥物在大鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)化情況進(jìn)行了探索。具體分為以下四個部分：
　　1．建立高效液相色譜-紫外檢測器對雷公藤紅素進(jìn)行定性定量分析的方法，并將其應(yīng)用于大鼠尾靜脈給藥后藥代動力學(xué)

3、研究。大鼠尾靜脈給藥后，血漿樣品經(jīng)乙酸乙酯萃取，用Unimicro ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)，以甲醇-10％醋酸(92:8，v/v)為流動相進(jìn)行洗脫，流速為1 mL·min-1，以大黃素為內(nèi)標(biāo)，在425 nm波長下進(jìn)行檢測，測定大鼠血漿中雷公藤紅素的濃度。雷公藤紅素的最低定量限為0.0486μg·mL-1，雷公藤紅素在0.0486~1.62μg·mL-1(r=0.9993)之間呈良好的線性關(guān)系。靜脈注射雷公

4、藤紅素(1mg·kg-1)后的主要藥代動力學(xué)參數(shù)：Cmax=0.48μg·mL-1，Tmax=5min，AUC0-τ=23.44μg·mL-1·min。通過方法學(xué)驗(yàn)證，所建立的大鼠血漿中雷公藤紅素濃度的HPLC測定方法靈敏、穩(wěn)定、準(zhǔn)確，并適用于大鼠體內(nèi)雷公藤紅素的藥代動力學(xué)研究。
　　2．建立超高效液相色譜-四級桿-飛行時間質(zhì)譜定量的方法，測定大鼠尾靜脈注射和灌胃給藥后血漿中雷公藤紅素的濃度，并將其應(yīng)用于大鼠給藥后體內(nèi)藥代動力學(xué)研

5、究。將大鼠血漿用乙酸乙酯提取后，以大黃素為內(nèi)標(biāo)，用UPLC-Q-TOF電噴霧負(fù)離子模式對雷公藤紅素進(jìn)行定性定量分析。方法的檢測限為4.86 ng·mL-1，定量限為10.53 ng·mL-1，雷公藤紅素在0.0243~0.81 mg·L-1之間呈良好的線性關(guān)系。通過方法學(xué)驗(yàn)證，證明該方法穩(wěn)定準(zhǔn)確，能夠用于生物樣品的檢測。
　　3．將雷公藤紅素對照品溶液在合適的色譜、質(zhì)譜條件下進(jìn)行UPLC-Q-TOF/MS/MS分析，通過考察碎片離

6、子情況，參考木栓烷類五環(huán)三萜化合物的質(zhì)譜裂解有關(guān)文獻(xiàn)，研究電噴霧正、負(fù)離子模式下雷公藤紅素的質(zhì)譜裂解規(guī)律。
　　4.利用UPLC-Q-TOF/MS/MS對大鼠尾靜脈給藥后體內(nèi)雷公藤紅素的生物轉(zhuǎn)化、代謝物鑒定進(jìn)行了初步探索。大鼠尾靜脈注射雷公藤紅素后，分別于0 min,15 min,5 h,24 h于眼底靜脈叢取血，分別用甲醇/乙腈混合溶劑、乙酸乙酯處理血漿，處理得到的樣品通過UPLC-Q-TOF/MS/MS分析。將給藥后不同時間點(diǎn)