Syncytin-1在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及其靜觀遺傳學(xué)調(diào)控.pdf

1、分類(lèi)號(hào)：R7302密級(jí)：學(xué)位類(lèi)別：科學(xué)學(xué)位日專(zhuān)業(yè)學(xué)位口圈學(xué)校代碼：10062學(xué)號(hào)：20071100學(xué)科門(mén)類(lèi)：醫(yī)學(xué)又肄鼉斜矢量博士學(xué)位論文DOCTORALDISSERTATION論文題目：Syncytin1在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及其表觀遺傳學(xué)調(diào)控TITLETheexpressionandepigeneticregulationofsyncytin1inendometriosis一級(jí)學(xué)科：If6i床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：腫瘤學(xué)論文作者：周洪淵指導(dǎo)

2、教師：李強(qiáng)教授導(dǎo)師組成員：江世文教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一。年五月天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要目的：確定syncytin1在子宮內(nèi)膜異位癥及子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜中的表達(dá)，探討syncytin1在子宮內(nèi)膜異位癥中的意義。通過(guò)檢測(cè)基因組總體甲基化的水平，明確總體甲基化和syncytin1表達(dá)水平之間的關(guān)系，探討總體甲基化對(duì)于syncytin1表達(dá)調(diào)控的影響。啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化程度和syncytin1表達(dá)之間的關(guān)系，明確其對(duì)

3、于syncytin1表達(dá)調(diào)控的作用。探討甲基轉(zhuǎn)移酶3b亞型和syncytin一1表達(dá)之間的關(guān)系，明確甲基轉(zhuǎn)移酶3b亞型和syncytin1啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化之間的相關(guān)性，探討甲基轉(zhuǎn)移酶3b亞型在syncytin1表達(dá)調(diào)控過(guò)程中的作用。材料和方法：從組織中提取RNA，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，然后應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR和免疫組化的方法，分別檢測(cè)syncytinq在子宮內(nèi)膜異位癥及子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜中的mRNA水平和蛋白水平，子宮內(nèi)膜

4、異位癥患者的子宮內(nèi)膜為對(duì)照組。選擇LINE1作為代表總體甲基化的基因，以重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化后的基因組DNA為模板，用LINE1的引物做PCR，然后用聯(lián)合亞硫酸氫鹽限制分析(combinedbisulfitcrestrictionanalysis，COBRA)的方法檢測(cè)LINE1的甲基化水平。為了在蛋白水平檢測(cè)總體甲基化的程度，做5mC的免疫組化染色。以重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化過(guò)的基因組DNA為模板，行syncytin1啟動(dòng)子區(qū)的巢式PCR，通過(guò)瓊

5、脂糖凝膠電泳將PCR產(chǎn)物分離純化出syncytin1的DNA，然后將純化DNA連入空質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染到感受態(tài)細(xì)胞，在LB培養(yǎng)基中37“C孵育14小時(shí)，提取質(zhì)粒DNA，并做syncytin1啟動(dòng)子區(qū)的DNA測(cè)序，對(duì)比兩組CpG島的甲基化程度和位點(diǎn)。為了進(jìn)一步探討啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化和syncytin1表達(dá)之間的關(guān)系，再用Cobra的方法檢測(cè)兩組CpG島的甲基化比例。從組織中提取RNA，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，然后以cDNA為模板，行甲基轉(zhuǎn)移

6、酶3b亞型的實(shí)時(shí)一定量PCR。結(jié)果：子宮內(nèi)膜異位癥中的mRNA表達(dá)水平，是對(duì)照組mRNA水平的19倍，免疫組化染色顯示，子宮內(nèi)膜異位癥中syncytin1的蛋白表達(dá)水平，亦高于對(duì)照組的蛋白水平。Cobra的結(jié)果顯示，在子宮內(nèi)膜異位癥和對(duì)照組，LINE1的甲基化比例分別為75％和74％，兩組之間沒(méi)有明顯差異，而免疫組化也表明，5mC的染色在兩組之間沒(méi)有明顯差異。測(cè)序的結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜異位癥和對(duì)照組syncytin一1啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基