TGF-β1及CTGF在骨不連接區(qū)表達(dá)的實驗研究.pdf

1、目的：骨折局部常常因為纖維組織及軟骨缺乏足夠的骨化而形成骨不連，而轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）及結(jié)締組織生長因子（CTGF）的協(xié)同具有明顯促進(jìn)軟骨及骨增殖和分化的特性，從而促進(jìn)骨愈合。本實驗通過觀察骨缺損不愈合和愈合過程中 TGF-β1及 CTGF的局部分布和表達(dá)水平差異，研究骨缺損不愈合的分子機(jī)理，進(jìn)一步探討TGF-β1及CTGF對骨折愈合的影響。
　　方法：1、制作骨折愈合及骨缺損不愈合動物模型。選成年新西蘭大白兔30只，

2、雌雄不限，隨機(jī)分為6組，每組5只，制造一側(cè)橈骨干骨缺損不愈合模型為實驗組，制造另一側(cè)骨折愈合模型為對照側(cè)。術(shù)后1、2、4、6、8、12周取材。2、X線及組織學(xué)觀察骨愈合及組織學(xué)成骨情況。3、免疫組化檢測TGF-β1及CTGF的表達(dá)。4、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測以上兩因子的基因表達(dá)。
　　結(jié)果：1、X線及組織學(xué)檢查顯示實驗組骨缺損區(qū)未形成骨性連接，主要為纖維結(jié)締組織所充填，骨缺損兩端有少量的膜內(nèi)成骨及軟骨內(nèi)成骨存在，大

3、部分肉芽組織及肥大軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化為纖維結(jié)締組織，斷端硬化，髓腔閉塞。對照組膜內(nèi)成骨及軟骨內(nèi)成骨均活躍，6周時骨折愈合。2、免疫組化顯示實驗組和對照組 TGF-β1及CTGF表達(dá)在2周時均明顯增強(qiáng)，但實驗組表達(dá)量明顯低于對照組（P<0.05），4-6周實驗組TGF-β1及CTGF在各種細(xì)胞中表達(dá)均明顯減少至微弱表達(dá)，而對照組在成骨細(xì)胞和周圍的骨基質(zhì)中仍有較強(qiáng)表達(dá)，差異有顯著性（P<0.05）,8周后兩組TGF-β1及CTGF表達(dá)均微弱，無顯

4、著性差異(P>0.05).3、RT-PCR檢測顯示：實驗組 TGF-β1mRNA在1、2、4、6周的相對表達(dá)量分別為（0.347±0.013、0.785±0.025、0.378±0.029、0.257±0.030），均明顯低于對照組的（0.425±0.020、0.950±0.035、0.764±0.022、0.156±0.012），差異有顯著性（P<0.05）。實驗組CTGFmRNA表達(dá)1、2、4、6、周分別為（0.305±0.015、

5、0.283±0.011、0.204±0.013、0.115±0.008），低于對照組同時段的1、2、4、6周（0.426±0.010、0.405±0.021、0.252±0.018、0.138±0.017），差異有顯著性（P<0.05）。8周后兩組TGF-β1mRNA及CTGFmRNA表達(dá)無明顯差異（P>0.05）
　　結(jié)論：
　　1、骨缺損由于缺乏足夠的膜內(nèi)成骨及軟骨內(nèi)成骨而形成骨不連，這是骨不連形成的重要原因。