抗ErbB2抗體chA21結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究及生物反應(yīng)器生產(chǎn)工藝摸索.pdf

1、ErbB2(Her2/neu/p185)是細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(EGFR)家族中的一員，它參與調(diào)控激活細(xì)胞信號(hào)通路，從而影響細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞增殖、調(diào)亡、分化、遷移等。在之前的工作中，本實(shí)驗(yàn)室研制了抗ErbB2單克隆抗體A21，并依此開發(fā)了抗ErbB2的嵌合抗體chA21，它也顯示了對(duì)高表達(dá)ErbB2的腫瘤細(xì)胞的體外和體內(nèi)的抑制活性，可用做免疫治療的藥物。本工作制備得到了chA21的單鏈抗體(scFv)與ErbB2胞外區(qū)(ECD)1-192

2、位氨基酸(命名為EPⅠ)的抗原-抗體復(fù)合物晶體，并對(duì)復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析，在此基礎(chǔ)上深入探討了chA21的抗原識(shí)別機(jī)制及其與生物學(xué)功能的關(guān)系，為該抗體藥物的作用機(jī)理提供了依據(jù)。正如復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)所揭示的，chA21的六個(gè)抗原互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)形成了一個(gè)寬闊的口袋樣結(jié)構(gòu)與ErbB2的三段不連續(xù)的loop結(jié)合，抗原-抗體結(jié)合界面總共包含17個(gè)特異性的氫鍵和超過(guò)170個(gè)范德華力接觸。這些數(shù)據(jù)顯示，chA21所結(jié)合的位點(diǎn)是一個(gè)不同于已經(jīng)

3、報(bào)道的ErbB2抗體的新位點(diǎn)，它包含ErbB2胞外區(qū)的第一和第二亞區(qū)的部分氨基酸殘基，并且與ErbB2的二聚結(jié)合界面相反。通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬，顯示一個(gè)嵌合抗體分子可以通過(guò)它的兩個(gè)抗原結(jié)合臂無(wú)位阻地結(jié)合兩個(gè)抗原分子，提示抗體chA21可能通過(guò)將細(xì)胞膜表面的ErbB2同二聚或異二聚體連接形成大的復(fù)合物從而加速ErbB2的內(nèi)吞和下調(diào)。進(jìn)一步的試驗(yàn)證明，chA21不僅可以明顯下調(diào)ErbB2，同時(shí)也能夠下調(diào)EGFR和ErbB3。對(duì)chA21與另兩個(gè)已