miRNA19a在肝癌中調(diào)控靶基因TNF的研究.pdf

1、目的:microRNAs是新發(fā)現(xiàn)的一種非編碼小分子單鏈RNA家族，在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，它通過(guò)與靶基因的信使RNA（mRNA）的3'-UTR的互補(bǔ)堿基配對(duì)結(jié)合，形成沉默復(fù)合體(RISC)，進(jìn)而降解mRNA或使其翻譯受阻。miRNA17-92基因簇是一個(gè)高度保守的基因簇，編碼miRNA17、miRNA18、miRNA19a、miRNA20、miRNA19b和miRNA92六個(gè)基因簇。目前研究證實(shí)miRNA17-92在惡性腫瘤

2、的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用，如B細(xì)胞淋巴瘤，肺癌，惡性黑色素瘤。研究還發(fā)現(xiàn)miRNA19可能是miRNA17-92中的關(guān)鍵致癌因子。但是關(guān)于miRNA17-92基因簇參與調(diào)控肝癌的細(xì)胞生物學(xué)特性的具體作用和機(jī)制目前還不清楚。肝細(xì)胞刺激因子HPPCn(HepatopoietinCn)是我們實(shí)驗(yàn)室在肝臟中發(fā)現(xiàn)的一種新的特異的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子。已經(jīng)有研究證實(shí)，肝癌標(biāo)本中HPPCn相對(duì)于癌旁組織存在高表達(dá)，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞的癌變與HPPCn的高

3、表達(dá)有關(guān)，患者的存活率與HPPCn的高表達(dá)亦成負(fù)相關(guān)。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)HPPCn對(duì)肝臟星型細(xì)胞的激活作用可以通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子TNF而被抑制。這提示HPPCn可能與miRNA17-92的表達(dá)存在一定的相關(guān)性。我們通過(guò)targetscan網(wǎng)站發(fā)現(xiàn)PTEN，TNF是miRNA19a的預(yù)測(cè)靶基因。本實(shí)驗(yàn)中主要研究在肝癌發(fā)生發(fā)展中miRNA17-92的各基因簇與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子HPPCn的關(guān)系及miRNA19a對(duì)預(yù)測(cè)靶基因的驗(yàn)證。
　　方法:首

4、先檢測(cè)肝癌標(biāo)本組織中miRNA17-92基因簇與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子HPPCn的表達(dá)相關(guān)性及miRNA19a與預(yù)測(cè)靶基因PTEN，TNF的表達(dá)相關(guān)性;然后構(gòu)建構(gòu)包含靶基因3'-UTR的PGL-3M重組質(zhì)粒，然后將重組質(zhì)粒和miRNA19a模擬物共同轉(zhuǎn)入HEK293細(xì)胞，利用雙熒光素酶系統(tǒng)檢測(cè)miRNA19a是否調(diào)控PTEN，TNF的表達(dá)。
　　結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn)肝癌標(biāo)本中miRNA17-92與HPPCn的各基因簇表達(dá)具有一定相關(guān)性，尤其是與