紅霉素對聚乙烯微粒誘導(dǎo)的單核細(xì)胞NF-κB活化及p65亞基mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察人外周血單核細(xì)胞和超高分子聚乙烯微粒(UHMWPE)與紅霉素(EM)的混合培養(yǎng)，證實磨損微粒能夠刺激單核細(xì)胞NF-κB表達(dá)，分析EM對單核細(xì)胞NF-κB p65亞基的細(xì)胞核內(nèi)移位及NF-κB mRNA表達(dá)的影響，探討EM抑制NF-κB的活化及NF-κB/P65 mRNA表達(dá)的機(jī)制以及對關(guān)節(jié)假體的無菌性松動的防治作用，為臨床應(yīng)用EM防治人工關(guān)節(jié)無菌性松動提供理論依據(jù)和實踐指導(dǎo)，使人工關(guān)節(jié)遠(yuǎn)期無菌性松動的保守治療成為可能。

2、 方法：實驗共分為6組：分別為A組：單核細(xì)胞+RPMI1640培養(yǎng)基；B組：單核細(xì)胞+UHMWPE；C組：單核細(xì)胞+UHMWPE+帕米磷酸鈉(10μg/ml)；D組：單核細(xì)胞+UHMWPE+EM(5μg/ml)：E組：單核細(xì)胞+UHMWPE+EM(10μg/ml)；F組：單核細(xì)胞+UHMWPE+EM(25μg/ml)。隨機(jī)選擇健康志愿者30例，每例采集外周血15 ml，肝素抗凝，應(yīng)用梯度離心法分離出單個核細(xì)胞，并計數(shù)制成約4×105/m

3、l的細(xì)胞懸液。在6孔板內(nèi)分別各加入3ml的細(xì)胞懸液，在37℃、5％CO2的恒溫恒濕細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時后，洗掉未貼壁細(xì)胞。按照每組方案施加不同的干預(yù)因素，即：A組僅加入培養(yǎng)基；B組加入UHMWPE；C組加入UHMWPE+帕米磷酸鈉；D、E、F組則加入UHMWPE和不同濃度的EM溶液。使帕米磷酸鈉濃度為10μg/ml，EM的濃度分別為5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml。然后置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，在相同條件下培養(yǎng)48小時后將細(xì)胞及培

4、養(yǎng)基混合物離心，分別以蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blotinging)檢測細(xì)胞核內(nèi)p65蛋白含量，細(xì)胞沉淀進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)實驗以檢測p65 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：UHMWPE組(B組)的細(xì)胞核內(nèi)p65蛋白含量明顯高于對照組A、C組，與EM聯(lián)合培養(yǎng)的D、E、F組的p65蛋白含量明顯低于UHMWPE刺激組，而C、F組及不同濃度EM的D、E組之間的p65蛋白含量的差異未見有統(tǒng)計學(xué)意義，但是隨著藥物濃度的增

5、加，D、E、F組的p65蛋白含量逐漸減少；同樣，B組的p65mRNA的表達(dá)呈強(qiáng)陽性，與A、C相比有顯著性差異，與其他p65mRNA表達(dá)明顯減弱的EM聯(lián)合作用的D、E、F組相比亦有顯著性差異，而A、C組及C、F組之間p65mRNA表達(dá)的差異未見有統(tǒng)計學(xué)意義。分析p65mRNA表達(dá)與胞核p65蛋白含量兩者間的相互關(guān)系，發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞p65mRNA表達(dá)與胞核p65蛋白含量存在正相關(guān)性。 結(jié)論：本實驗證實UHMWPE可以刺激單核細(xì)胞p65