中國(guó)花生主要推廣品種標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋庫構(gòu)建.pdf

1、花生具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，是我國(guó)重要的油料與經(jīng)濟(jì)作物。隨著品種改良步伐不斷加快，育種家沿著一定目標(biāo)、一定方向?qū)τN材料進(jìn)行長(zhǎng)期定向選擇，使得新育成的花生品種遺傳基礎(chǔ)日益變窄，僅僅依靠表型很難將不同品種加以區(qū)分。品種審定制度的改革，品種權(quán)的保護(hù)越來越受到重視。構(gòu)建DNA指紋圖譜，可以從DNA水平上將不同品種材料區(qū)分開，結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。本研究根據(jù)近10年來全國(guó)各省花生的推廣面積收集了覆蓋中國(guó)花生主要產(chǎn)區(qū)的48份花生品種材料進(jìn)行指紋圖譜構(gòu)建

2、，主要結(jié)果如下：
　?。?）本研究采用多態(tài)較好的96對(duì)SSR引物對(duì)48份材料進(jìn)行PCR擴(kuò)增，采用毛細(xì)管電泳進(jìn)行分子標(biāo)記帶型分析，篩選出25對(duì)多態(tài)性好，帶型清晰，條帶穩(wěn)定的引物。25對(duì)引物共擴(kuò)增出116個(gè)等位變異，等位變異數(shù)在2~11之間，平均等位變異數(shù)為4.64個(gè)，擴(kuò)增片段大小在113~467bp之間。按基因型讀取25對(duì)引物擴(kuò)增條帶，最終選出12對(duì)核心引物構(gòu)建了48個(gè)花生品種的DNA指紋圖譜，12對(duì)核心引物產(chǎn)生的57個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)將

3、其中的44份材料完全區(qū)分開，不同材料之間的差異位點(diǎn)均≥2。
　?。?）本研究為進(jìn)一步驗(yàn)證指紋圖譜的結(jié)果，對(duì)48份樣本進(jìn)行了遺傳多樣性和群體結(jié)構(gòu)分析。多態(tài)信息含量PIC(polymorphism information content)分析顯示，25對(duì)SSR引物的PIC值和基因多樣性分別為0.30~0.79和0.36~0.82，平均值分別為0.50和0.59；48份材料的遺傳相似系數(shù)范圍為0.27~0.59。聚類分析結(jié)果表明，在遺傳

4、相似系數(shù)0.968處，48個(gè)花生品種被聚集成45類，4個(gè)未被區(qū)分開的材料分別是白沙1016，遠(yuǎn)雜9102，遠(yuǎn)雜9307，駐花1號(hào)，其中白沙1016是其他三個(gè)材料的親本。以上結(jié)果表明本文所構(gòu)建的指紋圖譜是有效的。在遺傳相似系數(shù)（閾值）為0.705時(shí)，48份材料被劃分為三類，其中一類主要為普通型品種，剩下兩類主要為珍珠豆型品種。利用Structure2.3.4軟件分析發(fā)現(xiàn)，所有材料劃分為兩個(gè)亞群，第一個(gè)亞群（亞群Ⅰ）主要為珍珠豆型，第二個(gè)亞

5、群（亞群Ⅱ）主要為普通型，與聚類分析結(jié)果基本一致，并對(duì)兩個(gè)亞群分別進(jìn)行遺傳多樣性分析。
　?。?）本研究首次采用SNP標(biāo)記構(gòu)建花生指紋圖譜。利用KASP方法對(duì)測(cè)序獲得的SNP標(biāo)記進(jìn)行驗(yàn)證，從中選取384個(gè)驗(yàn)證準(zhǔn)確的SNP標(biāo)記對(duì)48份材料進(jìn)行基因分型。最終獲得16個(gè)SNP標(biāo)記將其中的36個(gè)品種完全區(qū)分開。未被區(qū)分開的5組品種為1）遠(yuǎn)雜9102、白沙1016、駐花1號(hào)和遠(yuǎn)雜9307；2）?；?號(hào)和山花9號(hào)；3）花育16和花育25；4）