抗恥垢分枝桿菌的化學(xué)遺傳學(xué)篩選方法的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、當(dāng)前在全球范圍內(nèi),結(jié)核病治療面著非常嚴(yán)峻的形勢。一方面,新藥研發(fā)耗費(fèi)大,周期長;另一方面,細(xì)菌耐藥性問題愈發(fā)嚴(yán)重。尋找新的藥物作用靶點是解決上述問題的關(guān)鍵。
  本論文以化學(xué)基因組學(xué)為基礎(chǔ),借鑒“高拷貝抑制技術(shù)”,在恥垢分枝桿菌(Mycobacterium,smegmatis)中過表達(dá)其基因組的各個基因,通過篩選對活性化合物抗性增加的克隆,尋找可能的作用靶點。
  將來自穿梭質(zhì)粒pMV261的oriM和aph基因插入到pCC

2、1FOS載體而獲得穿梭載體pEMAC,并用該載體住E.coli構(gòu)建了M.smegmatis基因組文庫。在將該載體及文庫質(zhì)粒導(dǎo)入M.smegmatis后,發(fā)現(xiàn)這些質(zhì)粒在M.smegmatis中不能穩(wěn)定存在。為解決質(zhì)粒不穩(wěn)定問題,先后嘗試用pMINDcos1載體構(gòu)建文庫和使用pMV261載體構(gòu)建小片段文庫(插入片段3.5~4.5 kb),同時通過敲除M.smegmatis recA基因以及對文庫質(zhì)粒去甲基化等手段試圖提高質(zhì)粒穩(wěn)定性。

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