STAT3、MMP-2及CyclinD1在EGCG抗鼻咽癌細(xì)胞CNE2中的表達(dá)變化及意義.pdf

1、目的：鼻咽癌是我國(guó)廣東、廣西及福建等南方地區(qū)的常見(jiàn)惡性腫瘤之一,目前其主要治療方法是放療加化療等綜合性治療,但其5年生存率只有50％左右,晚期病人的治療效果及生存時(shí)間更差。本研究旨在觀察表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)體外對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞的生長(zhǎng)影響,同時(shí)通過(guò)分析其過(guò)程中的STAT3、MMP-2、CyclinD1的表達(dá)變化,揭示EGCG抗鼻咽癌的機(jī)制,為開(kāi)發(fā)與尋找新藥以提高鼻咽

2、癌的治療效果提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1.實(shí)驗(yàn)室體外條件下培養(yǎng)鼻咽癌低分化細(xì)胞株CNE2,用不同濃度的EGCG(0、40、80、160mg/L)干預(yù)24h、48h、72h后,分別于倒置顯微鏡下觀察CNE2細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。2.使用不同濃度的EGCG作用CNE2細(xì)胞24h、48h、72h后,應(yīng)用MTT法間接檢測(cè)細(xì)胞增殖的變化,并計(jì)算其增殖抑制率。3.使用不同濃度的EGCG作用于CNE2細(xì)胞48h后,使用Hoechst33258染色觀

3、察細(xì)胞凋亡情況,并計(jì)算其凋亡率。4.應(yīng)用Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度EGCG作用后的CNE2細(xì)胞侵襲作用的變化。5.使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度的EGCG作用鼻咽癌細(xì)胞株CNE2不同時(shí)間后對(duì)細(xì)胞周期的影響。6.逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)EGCG抗鼻咽癌細(xì)胞株CNE2過(guò)程中STAT3、MMP-2、CyclinD1的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.倒置顯微鏡下觀察,發(fā)現(xiàn)CNE2細(xì)胞分裂相變少,部分細(xì)胞變圓,隨著EGCG濃度

4、的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng),培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)越來(lái)越多的細(xì)胞漂浮及壞死的現(xiàn)象。2.MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著EGCG的濃度增加及作用時(shí)間延長(zhǎng),EGCG對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的增殖抑制作用不斷增加,且呈濃度與時(shí)間依賴(lài)性(p<0.05)。3.Hochest33258染色結(jié)果顯示,EGCG處理CNE2細(xì)胞后出現(xiàn)了典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變?nèi)绾怂榱选⒑藵饪s等。與對(duì)照組比較,隨著EGCG濃度的增加,凋亡細(xì)胞數(shù)不斷增多(p<0.05)。4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示:

5、不同濃度的EGCG(0、40、80、160mg/L)分別作用于CNE2細(xì)胞24h、48h后,停滯在G1/G0期細(xì)胞百分率分別為:(46.67±0.38)%、(55.20±0.33)%、(62.33±0.28)%、(68.65±0.40)%和(49.12±0.28)%、(57.73±0.45)%、(64.36±0.26)%、(69.62±0.33)%。與對(duì)照組比較,各實(shí)驗(yàn)組G1/G0期細(xì)胞百分率明顯增加(P<0.05),各實(shí)驗(yàn)組兩兩比較差

6、異顯著(P<0.05),呈濃度與時(shí)間依賴(lài)性。5.不同濃度EGCG作用CNE2細(xì)胞后,Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:隨著EGCG濃度的升高,與對(duì)照組相比,CNE2細(xì)胞的侵襲作用呈濃度依賴(lài)性減弱(p<0.05)。6.逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)結(jié)果顯示:CNE2細(xì)胞中STAT3、MMP-2、CyclinD1mRNA的相對(duì)表達(dá)量隨著EGCG濃度升高與作用時(shí)間延長(zhǎng)有降低趨勢(shì)(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.EGCG呈濃度依賴(lài)