牙鲆(Paralichthys olivaceus)抗遲鈍愛德華氏菌和耐高溫家系篩選.pdf

1、牙鲆（Paralichthysolivaceus）為冷溫性、底棲型海水魚類，是中國、日本和韓國等國家的重要海水養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類。1992年以來，牙鲆人工養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，山東、河北、遼寧等地大規(guī)模開展了牙鲆工廠化、網(wǎng)箱和池塘養(yǎng)殖，其養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大,而且養(yǎng)殖區(qū)域也由北方擴張到南方的浙江、福建、廣西等省，取得了良好的經(jīng)濟和社會效益。但是，長期的近親交配和高密度養(yǎng)殖導致牙鲆種質退化，生長變慢，抗病力下降，導致病害頻發(fā)，產(chǎn)量下降，給牙鲆養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)帶來

2、巨大經(jīng)濟損失。傳統(tǒng)的魚病治療方法主要靠使用抗生素，而抗生素的大量使用不僅會產(chǎn)生藥物殘留、耐藥性和環(huán)境污染等問題，而且對消費者的健康也存在潛在的影響。因此，采用現(xiàn)代生物技術，培育抗病力提高的牙鲆新品種迫在眉睫，成為國家和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重大需求。溫度對魚類的生長、發(fā)育、繁殖、攝食、代謝、存活以及分布等生命過程有著直接的影響。長期的進化使魚類都有了自己的適宜溫度范圍,在這一溫度范圍內,魚類的生長達到最佳狀態(tài)。許多研究都表明，魚類的生長與溫度具有顯

3、著的相關性。有研究表明，牙鲆在水溫23℃以上攝食減少,在水溫達33℃時,有的成魚只能短暫存活,南方省份的沿海水溫較北方高,即使在北方，工廠化養(yǎng)殖在夏季水溫也會達到25℃以上，需要用深井海水降低溫度，這無疑增加了養(yǎng)殖成本。因此,研究高溫對牙鲆的耐受限度及其分子機理，培育耐高溫品系以及品種，不僅可以降低養(yǎng)殖成本,也對探索南北接力養(yǎng)殖新模式具有重要的參考意義
　　為了篩選出抗遲鈍愛德華氏菌和耐高溫的牙鲆家系，本文以近幾年我們選育出的牙鲆

4、抗病和快速生長家系以及從韓國引進的選育群體為親本建立的2013年牙鲆家系56個，并對其中32個家系進行了遲鈍愛德華氏菌人工感染實驗。確定了遲鈍愛德華氏菌對牙鲆家系的半致死濃度LD50為3.69×105CFU/mL后，從每個家系中隨機抽取75尾，按照0.2mL/10g體重腹腔注射半致死濃度的菌液，并設置1次重復。人工感染時水溫控制在（19±1）℃。從32個家系中共選取4800尾5月齡牙鲆幼魚進行感染，16天實驗結束后統(tǒng)計各家系存活率為8.

5、2～66.1％，平均存活率為31.2%。不同家系對遲鈍愛德華氏菌的抗感染能力表現(xiàn)出顯著差異（P<0.05）。篩選出6個存活率高于45%的抗病家系，發(fā)現(xiàn)2007年篩選出的抗鰻弧菌病家系F0768的后代家系在遲鈍愛德華氏菌感染后的存活率普遍很高，表現(xiàn)出抗遲鈍愛德華氏菌的能力。本研究為選育抗鰻弧菌和抗遲鈍愛德華氏菌的牙鲆優(yōu)良品系奠定了基礎，對牙鲆抗細菌病的分子機理研究及抗病新品種選育具有重要意義和應用價值；從2012年建立的15月齡的牙鲆家系

6、中抽取21個牙鲆家系用于耐高溫實驗，每個家系隨機抽取牙鲆各18尾，暫養(yǎng)3天待實驗魚狀態(tài)穩(wěn)定后開始實驗。按照1.5℃/d的升溫速度升溫,達到溫度后保持溫度恒定。每2h觀察一次，記錄每個家系實驗魚的體色變化、活動力大小、攝食強弱和死亡時間等信息，及時撈出死魚，測量其全長(從吻端到尾鰭末端)、體重，并剪取鰭條保存，90h后實驗結束，記錄每個家系的存活數(shù)目，測量存活魚的全長和體重。在32℃的高溫脅迫下，21個家系的存活率在0～47.1%之間，平

7、均存活率19.3%，其中，F(xiàn)1244、F1247、 F1210、F1242、 F1244和F1259這5個家系存活率大于35%，明顯高于其他組，將其定義為耐高溫家系，而F1255、 F1225和F1230這三個家系則全部死亡，死亡率達到了100%，將存活率小于10%的家系定義為熱敏感家系。耐高溫家系平均存活率為43.2%，而熱敏感家系只有0.041%，兩者差異極顯著（P＜0.01）。本次實驗篩選到了5個耐高溫家系，發(fā)現(xiàn)F0719的后代家