山東徐長卿幾種重要真菌病害病原鑒定.pdf

1、徐長卿(Cynanchum paniculatum(Bge.) Kitagawa)屬于蘿藦科，為多年生草本植物，是常用的中藥和民間草藥、民族藥，歷代臨床及民間都有廣泛的應(yīng)用，常作為鎮(zhèn)靜劑治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、腹脹及蕁麻疹和濕疹等。已從徐長卿中提存的有效藥物成分包括丹皮酚、C21類固醇及多種生物堿等，最近從徐長卿中提純的菲駢吲哚類生物堿在腫瘤治療方面顯示明顯療效，因此，徐長卿在醫(yī)藥上的用途也在不斷拓寬。
　　隨著醫(yī)藥業(yè)對徐長卿的需求量不斷

2、增加，野生徐長卿已不能滿足醫(yī)藥企業(yè)的需求。自1998年我國很多地區(qū)開始人工種植，由此帶來的病害問題也越來越突出，但關(guān)于該藥用植物病害方面的資料非常有限。為了解徐長卿病害種類及其發(fā)生危害特點，2010-2013年，我們對山東新泰、蒙陰、平邑等產(chǎn)區(qū)的徐長卿進行了系統(tǒng)調(diào)查，明確了山東徐長卿病害的種類及分布，對引起各病害的病原從形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)等方面進行了鑒定，研究結(jié)果填補了國內(nèi)外對該植物病害研究的空白。具體研究結(jié)果如下:
　　1.山東

3、徐長卿真菌病害種類及分布
　　調(diào)查發(fā)現(xiàn)，山東徐長卿產(chǎn)區(qū)常見真菌病害包括炭疽病、絲核菌葉枯病、立枯病和白絹病等。其中，炭疽病可危害莖稈、葉片和莢果，普遍分布于各調(diào)查地塊;葉枯病主要危害葉片和莖稈，常造成植株成片枯死;白絹病主要危害植株莖基部，在發(fā)病部位形成大量白色絮狀菌絲體和顆粒狀菌核，并可導(dǎo)致根系皮層腐爛和植株枯死;立枯病主要危害3-5葉期幼苗，可導(dǎo)致根系腐爛和幼苗枯死等癥狀。這幾種病害在徐長卿上發(fā)生均為國內(nèi)外首次報道。
　

4、　選擇部分代表菌株進行致病性測定，結(jié)果表明，各菌株都可使徐長卿的莖葉和莢果表現(xiàn)典型的病害癥狀，并可從發(fā)病組織上再次分離到相應(yīng)的病原，符合柯赫氏法則。并初步測定了炭疽病菌各類型菌株的寄主范圍，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各代表菌株都能使番茄、芒果等果實表現(xiàn)典型的病害癥狀，表明徐長卿并非該類炭疽菌的唯一寄主。
　　2.徐長卿炭疽病
　　從新泰、平邑、蒙陰等地采集徐長卿病害樣本，經(jīng)單胞分離，從發(fā)病葉片、莖稈和莢果共獲得103株炭疽菌分離物;形態(tài)學(xué)觀

5、察發(fā)現(xiàn)，103株分離物分可為4種類型，其中50株可產(chǎn)生彎月形分生孢子，53株產(chǎn)生柱狀分生孢子;從中選擇代表性菌株，對其中的β-tubulin(tub2)、HIS3、actin(ACT)、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH和rDNA ITS等多個基因進行序列分析和比較，并用MEGA4.0軟件對其聚類分析，結(jié)果表明，48株鑒定為平頭炭疽菌（Colletotrichum truncat

6、um），25株屬于尖孢炭疽菌（C.acutatum），其它30株分別屬于2個不同類型，但與目前已報道的Colletotrichum種都存在較大差異，經(jīng)初步鑒定，確定這2個種為新種。經(jīng)致病性鑒定發(fā)現(xiàn)，該幾種分離物為炭疽病致病菌。
　　3.徐長卿葉枯病
　　從蒙陰和新泰徐長卿種植區(qū)采集表現(xiàn)葉枯病癥狀的植株，組織分離法獲得24株絲核菌分離物。經(jīng)培養(yǎng)性狀和核相觀察、菌絲融合測定，結(jié)合rDNA ITS序列分析，將該分離物鑒定為立枯絲核

7、菌（Rhizoctonia solani）的AGI-IB融合群。致病性測定發(fā)現(xiàn)，該分離物為引起葉枯病的致病菌。
　　4.徐長卿立枯病
　　從蒙陰和泰安等地采集徐長卿發(fā)病幼苗，組織分離法從發(fā)病根部分離到32株絲核菌分離物，根據(jù)培養(yǎng)特征、核相觀察和菌絲融合測定，結(jié)合rDNA ITS序列分析，發(fā)現(xiàn)其中30株為立枯絲核菌(R.solani) AG4-HG-I融合群，1株為立枯絲核菌（R.solani）AG4-HG-Ⅲ融合群，1株為雙

8、核絲核菌AG-F融合群。致病性測定表明，各代表菌株均可使徐長卿幼苗表現(xiàn)典型的立枯病癥狀。說明該分離物為徐長卿立枯病的致病菌。
　　5.白絹病
　　從平邑和新泰等地采集病株樣本和發(fā)病植株上的菌核，經(jīng)組織分離和菌核直接培養(yǎng)，獲得11株分離物，觀察發(fā)現(xiàn)，各分離物在PDA平板形成白色絮狀菌絲和褐色菌核，表現(xiàn)核盤菌屬（Sclerotium）的典型特征;進一步對其rDNA ITS序列分析發(fā)現(xiàn)，該序列與GenBank中已提交的Sclero