耐輻射球菌DR-2566基因缺失突變株的構(gòu)建及其基因功能的初步分析.pdf

1、目的：
　　為了研究DR_2566基因在耐輻射球菌極端抗性機(jī)制中的作用，本課題通過(guò)生物信息學(xué)方法分析、預(yù)測(cè)其生物學(xué)功能并利用同源重組的方法，將目的基因進(jìn)行基因敲除，獲得DR_2566缺失突變株。檢測(cè)DR_2566在紫外輻射、過(guò)氧化氫、絲裂霉素C等極端抗性中發(fā)揮的作用，對(duì)DR_2566基因功能初步進(jìn)行研究。
　　方法：
　　1.對(duì)DR_2566基因及其對(duì)應(yīng)編碼蛋白DR_2566的高級(jí)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、生物學(xué)功能等，使用生物

2、信息學(xué)方法分析、預(yù)測(cè)。2.運(yùn)用同源重組的方法構(gòu)建DR_2566基因缺失突變株。
　　3.紫外輻照、過(guò)氧化氫及絲裂霉素C(Mitomycin,MMC)處理后,對(duì)野生型DR菌株、DR_2566基因缺失突變型DR菌株的生存率等進(jìn)行分析，初步研究DR_2566基因在DR菌極端抗性中的功能。
　　結(jié)果：
　　1.生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，基于整體核苷酸序列的搜索，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其他生物的基因組中存在DR_2566的同源基因，這說(shuō)明DR_

3、2566為DR菌基因組中特有的基因。結(jié)構(gòu)域分析結(jié)果提示， DR_2566為限制性內(nèi)切酶家族（restriction_endonuclease_like superfamily）的一個(gè)成員，具有極短補(bǔ)丁修復(fù)（Very short patch repair，VSR）核酸內(nèi)切酶Vsr功能(復(fù)制，重組和修復(fù))。
　　2.成功獲得了DR_2566基因上游片段、下游片段以及Kan抗性基因(含有GroEL基因啟動(dòng)子)的三個(gè)片段。將獲得的三個(gè)片段

4、通過(guò)T4連接酶連接三片段后的回收產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DR感受態(tài)，經(jīng)卡那霉素Kan篩選，成功構(gòu)建了DR_2566基因缺失突變株。
　　3.制作 DR_2566基因缺失突變株、野生株在紫外輻照、過(guò)氧化氫、絲裂霉素C處理下的存活率曲線，從中可以看出，DR_2566基因缺失突變株的存活率均明顯低于其野生型菌株的存活率，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　DR_2566基因的缺失導(dǎo)致突變株對(duì)紫外輻射、過(guò)氧化氫、絲裂霉素C的