miR-139-5p在高糖內(nèi)皮細胞損傷中的作用.pdf

1、目的:探討miR-139-5p在高糖誘導(dǎo)下內(nèi)皮細胞中表達的變化及其對內(nèi)皮細胞功能的調(diào)控作用。
　　方法:1.體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical veinendothelial cells，HUVECs)，利用microRNA實時定量PCR的方法檢測持續(xù)的高糖(30mmol/L)刺激下miR-139-5p表達水平在7天內(nèi)的變化情況，與在正常糖(5 mmol/L)下培養(yǎng)的HUVECs miR-139-5p表達水

2、平對比;2.通過miRNA mimic或miRNA Inhibitor外源性的上調(diào)或下調(diào)HUVECs miR-139-5p表達水平，用劃痕實驗和tranwell小室實驗檢測遷移能力，用CCK-8試劑盒檢測增殖能力，通過檢測HUVECs的Caspase3活性檢測凋亡情況，并用體外成管試劑盒檢測成管能力;3.通過Western Blot方法檢測IGF-1R、pIGF-1R、Akt、pAkt、VEGFA、Erk1/2及pERK1/2蛋白表達水

3、平，以確定miR-139-5p的靶蛋白及其信號通路。
　　結(jié)果:1.miR-139-5p表達隨高糖作用時間的延長而增高(P＜0.05)，至第7天時其表達升高明顯，是正常對照組的6倍。而在等滲的甘露醇組未觀察到miR-139-5p表達水平變化(P＞0.05)。2.細胞劃痕實驗和transwell小室遷移實驗顯示，miR-139-5p高表達時細胞遷移能力被抑制(P＜0.05)，而抑制miR-139-5p表達時細胞遷移增強(P＜0.05

4、);上調(diào)miR-139-5p表達促進細胞增殖(P＜0.05); miR-139-5p表達上調(diào)48小時對內(nèi)皮細胞凋亡無明顯影響(P＞0.05)，而96小時后顯示內(nèi)皮細胞凋亡增加(P＜0.05)，下調(diào)miR-139-5p表達內(nèi)皮細胞凋亡降低(P＜0.05); miR-139-5p對內(nèi)皮細胞排列成線長度、形成血管芽數(shù)量等檢測內(nèi)皮細胞成管能力的指標均有抑制作用(P＜0.05)。3.外源性的上調(diào)或下調(diào)miR-139-5p后，IGF-1R蛋白表達均

5、隨之下降或升高;IGF-1R信號通路下游的Akt水平變化不明顯(P＞0.05)，而其活化形式pAkt蛋白表達隨之變化(P＜0.05); miR-139-5p對胞內(nèi)VEGF表達有抑制作用(P＜0.05);但miR-139-5p表達改變時，ERK1/2及pERK表達均無明顯變化(P＞0.05)。
　　結(jié)論:人臍靜脈內(nèi)皮細胞在高糖作用下miR-139-5p表達增加，miR-139-5p通過抑制IGF-1R/Akt/通路及VEGF的表達，