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文檔簡介
1、目的:探討miR-139-5p在高糖誘導(dǎo)下內(nèi)皮細胞中表達的變化及其對內(nèi)皮細胞功能的調(diào)控作用。
方法:1.體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical veinendothelial cells,HUVECs),利用microRNA實時定量PCR的方法檢測持續(xù)的高糖(30mmol/L)刺激下miR-139-5p表達水平在7天內(nèi)的變化情況,與在正常糖(5 mmol/L)下培養(yǎng)的HUVECs miR-139-5p表達水
2、平對比;2.通過miRNA mimic或miRNA Inhibitor外源性的上調(diào)或下調(diào)HUVECs miR-139-5p表達水平,用劃痕實驗和tranwell小室實驗檢測遷移能力,用CCK-8試劑盒檢測增殖能力,通過檢測HUVECs的Caspase3活性檢測凋亡情況,并用體外成管試劑盒檢測成管能力;3.通過Western Blot方法檢測IGF-1R、pIGF-1R、Akt、pAkt、VEGFA、Erk1/2及pERK1/2蛋白表達水
3、平,以確定miR-139-5p的靶蛋白及其信號通路。
結(jié)果:1.miR-139-5p表達隨高糖作用時間的延長而增高(P<0.05),至第7天時其表達升高明顯,是正常對照組的6倍。而在等滲的甘露醇組未觀察到miR-139-5p表達水平變化(P>0.05)。2.細胞劃痕實驗和transwell小室遷移實驗顯示,miR-139-5p高表達時細胞遷移能力被抑制(P<0.05),而抑制miR-139-5p表達時細胞遷移增強(P<0.05
4、);上調(diào)miR-139-5p表達促進細胞增殖(P<0.05); miR-139-5p表達上調(diào)48小時對內(nèi)皮細胞凋亡無明顯影響(P>0.05),而96小時后顯示內(nèi)皮細胞凋亡增加(P<0.05),下調(diào)miR-139-5p表達內(nèi)皮細胞凋亡降低(P<0.05); miR-139-5p對內(nèi)皮細胞排列成線長度、形成血管芽數(shù)量等檢測內(nèi)皮細胞成管能力的指標均有抑制作用(P<0.05)。3.外源性的上調(diào)或下調(diào)miR-139-5p后,IGF-1R蛋白表達均
5、隨之下降或升高;IGF-1R信號通路下游的Akt水平變化不明顯(P>0.05),而其活化形式pAkt蛋白表達隨之變化(P<0.05); miR-139-5p對胞內(nèi)VEGF表達有抑制作用(P<0.05);但miR-139-5p表達改變時,ERK1/2及pERK表達均無明顯變化(P>0.05)。
結(jié)論:人臍靜脈內(nèi)皮細胞在高糖作用下miR-139-5p表達增加,miR-139-5p通過抑制IGF-1R/Akt/通路及VEGF的表達,
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