B型血友病FIX基因突變與發(fā)病機制研究.pdf

1、研究目的:對3例遺傳性凝血因子Ⅸ缺陷癥的患者進行了臨床調(diào)查及家系系譜分析,并在分子水平上分析HB基因缺陷及其類型,研究疾病本質(zhì)及其發(fā)病機制,加深對HB的認識。
　　方法:采用活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原(Fg)、凝血因子FⅨ活性(FⅨ:C)、凝血因子FⅧ活性(FⅧ:C)等測定進行HB表型診斷;采集HB患者家系先證者及家系其他成員的外周靜脈血,提取基因組DNA;根據(jù)NCBI上

2、GenBank中的FⅨ基因參考序列,利用PrimerPremier5軟件設計9對引物,采用PCR法對先證者及可疑攜帶者FⅨ基因外顯子及側(cè)翼序列進行擴增,運用雙脫氧鏈終止法在ABI3730XL測序儀上對PCR產(chǎn)物進行測序,結(jié)合Chromas2軟件及BLAST將測序結(jié)果與GenBank中參考序列進行比對,尋找基因突變;用長鏈聚合酶鏈反應(LD-PCR)及瓊脂糖凝膠電泳對F9基因大片段缺失進行檢測。
　　結(jié)果:通過PCR及基因測序,在3

3、例血友病患者FⅨ基因中,其中2例發(fā)現(xiàn)錯義突變:患者1為國際上相對罕見的一例女性純合血友病患者,其6號外顯子發(fā)現(xiàn)g.25377C>T(p.Arg191Cys)純合點突變;家系1先證者為男性患者,其4號外顯子發(fā)現(xiàn)g.15437G>A(p.Gly125Glu)點突變;家系2先證者同樣也是男性患者,在其基因中發(fā)現(xiàn)包含4、5號外顯子及4號內(nèi)含子的11214bp的大片段缺失,為新發(fā)現(xiàn)的變異,在國際上首次報道,并通過分段PCR及測序發(fā)現(xiàn)了該缺失的在基