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文檔簡介
1、哺乳動(dòng)物胚胎的冷凍保存在動(dòng)物種質(zhì)資源保存方面日益顯示出強(qiáng)大的應(yīng)用潛力。豬的胚胎冷凍保存對(duì)于良種資源的保存和世界范圍內(nèi)豬的品種改良非常重要,備受關(guān)注。自從1998年Vajta用OPS管成功冷凍豬桑椹胚和囊胚以來,玻璃化冷凍顯示出了極大優(yōu)勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)在研究了豬體外受精、胚胎培養(yǎng)條件后運(yùn)用OPS管冷凍了豬的體外受精胚胎,比較了不同時(shí)期、不同冷凍保護(hù)劑和不同預(yù)處理方法冷凍早期體外受精胚胎的效果,旨在建立一套有效的豬體外受精胚的玻璃化冷凍保存技術(shù).
2、本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果如下: 1.以豬新鮮精液、冷凍豬新鮮精液進(jìn)行豬的體外受精,以活力較低(<0.5)且畸形率較高(>30%)的新鮮精液進(jìn)行體外受精后受精胚的卵裂率較活力(>0.8)和形態(tài)(畸形率<10%)都正常的鮮精組差異不顯著(51%vs53.6%),但是受精后桑椹胚的發(fā)育率明顯低于正常鮮精組(28.9%vs47.4%);以活力較高(>0.5)的凍精進(jìn)行體外受精后受精胚的卵裂率和桑椹胚的發(fā)育率與正常的鮮精組無明顯差異(54.3%vs5
3、1.1%,48.2%vs45.4%);以活力(≤0.4)較低的凍精進(jìn)行體外受精其受精胚的卵裂率較活力(>0.5)高的凍精組無明顯差異(56.4%vs54.3%),但是受精后桑椹胚的發(fā)育率明顯低于活力高的凍精組(37.0%vs48.2%)。另外,用不同精-卵比例(分別為Group A:12000:1、GroupB:6000:1、Group C:3000:1)凍精進(jìn)行體外受精,發(fā)現(xiàn)A組受精胚的卵裂率(37.5%)和桑椹胚的發(fā)育率(34.4%
4、)都明顯低于B、C組,后兩組受精胚的卵裂率和桑椹胚的發(fā)育率無明顯差異(54.3%vs 54.2%,48.5%vs 45.7%)。結(jié)果表明精液質(zhì)量會(huì)影響體外受精胚的后續(xù)發(fā)育;無論是鮮精或是凍精,精子活力并不是影響體外受精卵裂率的決定因素;體外受精時(shí)合適的精卵比例提高了受精胚后續(xù)的發(fā)育能力。 2.采用NCSU-23和PZM-3中培養(yǎng)后的卵裂率分別是54.7%、55.0%,差異不顯著;前者獲得了46.2%的桑椹胚發(fā)育率,比后者40.3
5、%的桑椹胚發(fā)育率高,但兩者差異不顯著。單獨(dú)采用NCSU-23培養(yǎng)豬體外受精胚卵裂率和桑椹胚的發(fā)育率分別是61.1%和47.2%,與輸卵管上皮細(xì)胞單層共培養(yǎng)后卵裂率和桑椹胚的發(fā)育率分別是63.4%和49.3%。共培養(yǎng)后的卵裂率和桑椹胚的發(fā)育率都稍高于單獨(dú)用NCSU-23培養(yǎng),但兩者差異不顯著。 3.采用EDS(15%乙二醇、15%二甲基亞砜、0.5M蔗糖)直接冷凍合子期受精胚獲得了62.3%的存活率,顯著高于2-8細(xì)胞、8-16細(xì)
6、胞、桑椹胚組,后三組冷凍解凍后的胚胎存活率都很低,分別是8.7%、4.4%和5.6%。 4.采用ES(40%乙二醇、0.5M蔗糖)直接冷凍冷凍合子期受精卵解凍后形態(tài)正常率和存活率分別只有53.3%和31%,明顯低于EDS組(90%和72.7%),說明EDS冷凍保護(hù)效果好于ES。用細(xì)胞松弛素B處理合子期體外受精卵冷凍解凍后的形態(tài)正常率是60.6%,明顯低于直接冷凍組(81.7%);CB處理合子期體外受精卵冷凍解蒜后受精卵的存活率為
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