心臟鈉通道基因(SCN5A)突變致擴張型心肌病的臨床及基礎研究.pdf

1、第一部分:SCN5A基因A1180V突變致家族性擴張型心肌病研究
　　目的:通過已發(fā)現(xiàn)的心臟鈉通道基因(SCN5A)A1180V突變相關的擴張型心肌病(dilatedcardiomyopathy，DCM)的家系進行隨訪及進一步確認其在中國人群中的攜帶率，驗證A1180V突變在家族性DCM中的致病作用，并進一步探討該突變致DCM的臨床特征及病情演變特點。
　　方法:參考前期資料，對該家系中健在的7名A1180V突變攜帶者及8名

2、非攜帶者予以詢問病史及12導聯(lián)心電圖（electrocardiography,ECG）、超聲心動圖檢查?；仡櫺钥偨Y分析該家系中10名突變攜帶者（含3名已故的攜帶者），8名非攜帶者及1名已故的基因型不詳成員的臨床資料。于復旦大學附屬中山醫(yī)院招募的共460位正常志愿者作為此次研究的健康對照組。收集志愿者靜脈血后提取血中DNA，對SCN5A基因外顯子20的全測序，分析有無A1180V突變，推測A1180V在中國正常人群中的攜帶率。檢索dbSN

3、P和1000Genomes數(shù)據(jù)庫中A1180V在中國（亞洲）人群中的攜帶率。統(tǒng)計學處理分別采用SPSS16.0和SAS軟件完成。
　　結果:隨訪期間，3名A1180V突變攜帶者首次診斷為一度房室傳導阻滯(atrioventricularblock，AVB)或二度Ⅰ型AVB;1名A1180V突變攜帶者由一度AVB進展為DCM伴三度AVB?？偨Y該家系中所有A1180V突變攜帶者病史資料可得出，A1180V致家族性DCM發(fā)病的首發(fā)癥狀常

4、為一度AVB，平均診斷年齡為(34±3.0)歲，大約在5年內逐漸進展為DCM伴三度AVB。通過測序分析發(fā)現(xiàn)，A1180V在中國正常人群中的攜帶率為0％(0/460)。檢索數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)dbSNP中亞洲人群中所有數(shù)據(jù)合并后A1180V突變攜帶率約為6.3％(4/63)與我們的研究顯著差異（p=5.3×10-5），1000Genomes中中國成年人該突變攜帶率約為0.51％(1/197)，同樣與dbSNP數(shù)據(jù)庫存在顯著差異(p=0.013)。<

5、br>　　結論:本研究證實了A1180V突變對家族性DCM的致病作用及致病特點，并且在中國人群中是一有意義的致病突變。對該家系定期隨訪觀察，有助于發(fā)現(xiàn)A1180V突變攜帶者的早期病變。
　　第二部分:SCN5A基因R225Q突變雜合小鼠心功能觀察分析
　　目的:通過構建攜帶R225Q突變雜合小鼠模型，觀察其相對于野生對照組小鼠，在自然生長下心臟功能和結構變化，并進一步驗證可能機制。
　　方法:利用基因工程構建攜帶有SC

6、N5A基因R225Q突變的雜合小鼠模型。構建相應引物鑒定小鼠基因型，鑒定成功后入組。運用小動物心臟超聲監(jiān)測不同年齡的轉基因小鼠心室腔內徑及心功能變化，具體包括左室舒張期末內徑(leftventricularend-diastolicdiameter,LVEDD)、左室收縮期末內徑(leftventricularend-systolicdiameter,LVESD)、舒張末期左室前壁厚度(leftventriculardiastolica

7、nteriorwall，LVAW;d)、舒張末期左室后壁厚度(leftventriculardiastolicposteriorwall，LVPW;d)、左室射血分數(shù)（leftventricularejectionfraction，LVEF）、左室內徑縮短率（leftventricularfractionalshortening，LVFS）。60周齡小鼠處死后制作石蠟切片，蘇木精-伊紅(hematoxylin-esosin，HE)染色分

8、析病理形態(tài)特點。
　　結果:鑒定雜合小鼠合格后入組觀察，相對于野生型小鼠，R225Q突變雜合小鼠（實驗組）基礎狀態(tài)欠佳，個體差異較大，但是40周齡時體重卻顯著高于野生型小鼠（29.67±4.70vs27.36±1.81，p=0.018）。40周齡心超結果顯示，R225Q突變雜合小鼠心功能較WT小鼠差(EF:69.62±2.25vs72.38±9.72，p=0.035;FS:38.70±1.71vs41.12±8.17,p=0.02

9、9),LVEDD,LVESD,LVPW;d及LVAW;d無顯著性差異。鑒于實驗周期較長且兩組小鼠年齡不匹配，心超監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)實驗組小鼠60W心功能較40W顯著降低(EF:62.79±7.50vs69.62±2.25，p=0.000;FS:33.70±5.63vs38.70±1.71,p=0.000;LVAW;d:0.63±0.03vs0.69±0.02，p=0.002)，LVEDD，LVESD，LVPW;d無顯著性差異。HE染色后觀察到兩