膠原支架化學(xué)交聯(lián)VEGF促進(jìn)細(xì)胞化和血管化.pdf

1、背景：目前，許多學(xué)者都在進(jìn)行構(gòu)建血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)釋放系統(tǒng)的研究，用于創(chuàng)傷修復(fù)中以實(shí)現(xiàn)促進(jìn)血管生成、加快傷口愈合的作用。膠原由于良好的生物相容性，常被用作因子釋放系統(tǒng)的支架或載體。但由于膠原較快的降解速度，以及與生長因子的有限吸附力，導(dǎo)致在傷口部位很難維持足夠濃度的生長因子。
　　 目的：為了增強(qiáng)VEGF與膠原支架的結(jié)合力，減慢膠原支架的降解速度，本課題采用Traut試劑和Sulfo-SMCC交聯(lián)劑，把VEGF直接

2、交聯(lián)到膠原支架上。
　　 方法：用打孔器規(guī)范化制備實(shí)驗(yàn)用膠原膜，掃描電鏡(SEM)觀察其表面形貌。膠原膜與不同濃度的Traut試劑反應(yīng)，使膠原膜帶上巰基(-SH)；利用可檢測巰基的Ellman試劑檢測膠原上引入巰基的量并篩選出本實(shí)驗(yàn)用的Traut的合適濃度。采用ELISA實(shí)驗(yàn)比較利用交聯(lián)劑Sulfo-SMCC的化學(xué)交聯(lián)和簡單物理吸附兩種方法下VEGF與膠原支架體外結(jié)合的差異。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，把膠原膜空白組、經(jīng)過交聯(lián)劑浸泡的膠原膜組

3、、膠原膜直接吸附VEGF組以及膠原膜交聯(lián)VEGF組一共四組樣本，在SD大鼠皮下包埋7天和14天后取出樣本，測量樣本余留的大小，比較經(jīng)過不同處理的膠原膜的降解速度；對(duì)各組樣本進(jìn)行HE染色和免疫組化染色后，觀察和比較四組膠原膜細(xì)胞化和血管化的情況。
　　 結(jié)果：掃描電鏡下，實(shí)驗(yàn)用膠原膜是多孔的結(jié)構(gòu)。Traut試劑與膠原膜反應(yīng)能在膠原膜上引入巰基基團(tuán)，并可被Ellman試劑檢測得到。當(dāng)Traut溶液濃度為2.5mg/ml時(shí)，膠原膜樣本