抑制趨化因子受體CCR5保護小鼠及靈長類動物同種異體移植心臟的實驗研究.pdf

1、第一部分CCR5單克隆抗體延長小鼠異位移植心臟存活時間的研究
　　 目的：研究抑制趨化因子受體CCR5對小鼠異位移植心臟的保護作用。
　　 方法：近交系BALB/c 小鼠做為供體，近交系C57 小鼠做為受體建立小鼠腹部異位心臟移植模型，將其隨機分為4組：CCR5mAb+環(huán)孢素組 (16只)，CCR5mAb組 (8只)，環(huán)孢素組 (8只)，空白對照組 (8只)。聯(lián)合治療組于術后第18天處死8只小鼠，取出異位心臟，其他小鼠于

2、異位移植心臟功能喪失時取出心臟。流式細胞術檢測各組異位移植心臟內Treg細胞水平；實時熒光定量法檢測各組異位移植心臟內Foxp3以及細胞因子IL-2、IL-10、TGF-β、INF-γ mRNA的表達水平；免疫組化方法檢測各組異位心臟內CCR5+、CD4+、CD8+以及CD4+CD25+Foxp3+T細胞的浸潤情況；HE/EvG 染色觀察各組異位心臟急慢性排斥反應的程度。
　　 結果：CCR5mAb 聯(lián)合環(huán)孢素組可以明顯延長異位

3、移植物存活時間，減少移植物內CD4+和CD8+T細胞的數(shù)量，增加CD4+CD25+Foxp3+T細胞的比例。同時，CCR5mAb 聯(lián)合環(huán)孢素組還可以降低移植物內IL-2，INF-γ mRNA的水平，增加IL-10和Foxp3 mRNA的水平，TGF-βmRNA的水平在聯(lián)合治療組第18天明顯升高，但在第90天又降至對照組水平。過繼性輸注Treg細胞可以明顯延長移植物存活時間。
　　 結論：CCR5mAb 聯(lián)合環(huán)孢素可以有效的減輕急

4、慢性排斥反應，保護異位移植心臟。
　　 第二部分 CCR5拮抗劑Maraviroc 保護靈長類動物異位移植心臟的研究
　　 目的：研究CCR5拮抗劑Maraviroc 對靈長類動物異位移植心臟的保護作用。
　　 方法：建立靈長類動物恒河猴腹部異位心臟移植模型，將其隨機分為4組：MVC+CsA組 (MVC/CsA)，MVC組，CsA組和對照組。MVC/CsA組分別于術后第9，30，45行直視下心內膜活檢，并于第24

5、0天取出異位心臟。MVC組和CsA組于術后第9天行直視下心內膜活檢，并于異位移植心臟功能喪失時取出心臟。利用組織化學的方法檢測異位移植心臟內C3d，CCR5，CD4，CD8，CD68，Arg1，Mrc1 and PPARγ的表達情況，同時應用流式細胞術檢測不同時間點受體外周血T細胞亞類包括Th1，Th2，Th17 and Treg的表達情況。
　　 結果：MVC/CsA組可以明顯延長異位移植物存活時間至240天。同時MVC/Cs

6、A 還可以延緩受體體內抗供體抗體的產生，減少移植物內CCR5+，CD4+，CD8+和 CD68+細胞的數(shù)量，減少Th1，Th17細胞的浸潤，增加Th2，Treg細胞的聚集。另外MVC/CsA 還可以增加受體外周血及異位心臟內AAM以及PPARγ的表達。
　　 結論：CCR5拮抗劑Maraviroc 聯(lián)合環(huán)孢素可以有效地抑制排斥反應，從而保護靈長類動物異位移植心臟。
　　 第三部分MVC/CsA 通過PPARγ信號通路激活

7、AAM
　　 目的：探討MVC/CsA與AAM以及PPARγ之間的相互關系。
　　 方法：在體外淋巴細胞混合實驗中，加入CCR5拮抗劑Maraviroc以及環(huán)孢素，觀察AAM表面標志Arg1和Mrc1 mRNA的表達情況，對照組除了加入MVC/CsA 外，還加入特異性的PPARγ抑制劑BADGE，然后觀察Arg1和Mrc1 mRNA的表達情況。體內實驗進一步觀察PPARγ抑制劑BADGE 對異位移植心臟內Arg1和Mrc

8、1表達情況的影響。進而，通過體內淋巴細胞混合實驗觀察CCR5拮抗劑Maraviroc 對Th2 類細胞因子表達的影響，體外實驗觀察Th2 類細胞因子IL-4和IL-13 對PPARγ以及Arg1和Mrc1表達情況的影響。
　　 結果：體外淋巴細胞混合實驗及體內實驗均證明MVC/CsA 可以有效促進Arg1和Mrc1mRNA的表達，而應用PPARγ抑制劑BADGE后，Arg1和Mrc1 mRNA的表達水平也受到明顯的抑制。另外，M