MMP-9-TIMP-1與慢性腎衰竭大鼠胸主動(dòng)脈血管彈性功能的關(guān)系.pdf

1、目的:本研究通過構(gòu)建慢性腎衰竭大鼠模型，檢測其胸主動(dòng)脈血管彈性指標(biāo)脈搏波傳導(dǎo)速度(PWV)與血管壁基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制劑(TIMP-1)的表達(dá)情況，探討慢性腎衰竭中血管彈性的改變情況，PWV與胸主動(dòng)脈血管壁MMP-9、TIMP-1的表達(dá)是否存在相關(guān)性及可能機(jī)制，為延緩慢性腎衰竭血管彈性的改變提供線索。
　　 方法:
　　 1.分組本論文采用完全隨機(jī)對(duì)照的研究方法，將于河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購買的36

2、只清潔級(jí)、健康、雄性、體質(zhì)量為170-230g的wistar大鼠，在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院動(dòng)物中心屏障環(huán)境適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)抽取18只行5/6腎切除術(shù)，構(gòu)建慢性腎衰竭大鼠模型（模型組），剩余18只行假手術(shù)（假手術(shù)組）。
　　 2.方法兩組大鼠于屏障環(huán)境飼養(yǎng)12周后通過多導(dǎo)電生理儀記錄動(dòng)脈的壓力波形，測量大鼠胸主動(dòng)脈-腹主動(dòng)脈內(nèi)兩個(gè)導(dǎo)管尖端的距離(D)，計(jì)算胸主動(dòng)脈-腹主動(dòng)脈壓力的時(shí)間延遲(T)，計(jì)算PWV，PWV=D/T。通過

3、心臟取血留取血標(biāo)本，處死大鼠后取其胸主動(dòng)脈下段及殘余腎臟，部分于10％福爾馬林溶液中國定，余標(biāo)本于-80℃冰箱保存，分離出的血清于-20℃冰箱保存。對(duì)大鼠腎臟組織進(jìn)行HE染色，觀察腎臟結(jié)構(gòu)的病理改變，化驗(yàn)血清鈣、磷、尿素氮、肌酐，以判斷慢性腎衰竭大鼠模型是否建立成功。對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈下段血管壁進(jìn)行常規(guī)HE染色及免疫組化MMP-9、TIMP-1染色，檢測模型組和假手術(shù)組胸主動(dòng)脈血管壁上MMP-9、TIMP-1的表達(dá)情況。
　　 3.

4、統(tǒng)計(jì)分析用SPSS13.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，評(píng)價(jià)模型組和假手術(shù)組間彈性指標(biāo)PWV及血清指標(biāo)，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s），兩組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(independent-sample t test);模型組和假手術(shù)組間胸主動(dòng)脈下段血管壁MMP-9和TIMP-1陽性表達(dá)采用Fisher確切概率法。對(duì)模型組內(nèi)PWV與胸主動(dòng)脈血管壁MMP-9及TIMP-1的表達(dá)進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析。P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

5、。
　　 結(jié)果:
　　 1.腎臟病理改變及血清學(xué)指標(biāo)假手術(shù)組大鼠腎組織未見明顯病變，慢性腎衰竭大鼠模型腎臟HE染色病理改變:多數(shù)腎小球內(nèi)系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)明顯增生，部分腎小球呈缺血性皺縮，可見球性硬化;腎小管可見局灶性、節(jié)段性上皮細(xì)胞扁平、刷狀緣脫落，腎小管高度擴(kuò)張及灶狀萎縮，腎間質(zhì)大量單核、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤，可見纖維化形成。
　　 模型組的血清鈣、肌酐、尿素氮水平與假手術(shù)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，分別為1.96

6、±0.43 vs.2.27±0.26，P＜0.05;60.00±15.66 vs.40.06±5.38，P＜0.01;13.61±2.10 vs.10.19±2.47，P＜0.01;模型組的血清磷與假手術(shù)組比較無差別，1.94±0.39 vs.2.09±0.34，P＞0.05。
　　 2.脈搏波傳導(dǎo)速度的比較通過計(jì)算脈搏波傳導(dǎo)速度反應(yīng)血管彈性功能，模型組的PWV高于假手術(shù)組，11.98±2.84 vs.4.66±0.47，P＜0

7、.01，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的血管發(fā)生硬化，彈性明顯減低。
　　 3.免疫組織化學(xué)染色光鏡觀察應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)比較模型組和假手術(shù)組胸主動(dòng)脈血管壁MMP-9及TIMP-1的表達(dá)。MMP-9、TIMP-1的陽性表達(dá)為胞漿呈棕黃色或棕褐色。假手術(shù)組胸主動(dòng)脈血管壁上有少量MMP-9、TIMP-1的表達(dá)。模型組胸主動(dòng)脈血管壁上MMP-9、TIMP-1的陽性表達(dá)率分別為83.33％(15/18)和77.78％(14/

8、18)，而假手術(shù)組的陽性表達(dá)率分別為12.5％(2/16)和18.75％(3/16)。模型組胸主動(dòng)脈壁上MMP-9、TIMP-1的陽性表達(dá)率明顯高于其在正常胸動(dòng)脈壁上的表達(dá)。經(jīng)Fisher確切概率法統(tǒng)計(jì)分析，模型組與假手術(shù)組胸主動(dòng)脈血管壁上MMP-9、TIMP-1的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 4.模型組脈搏波傳導(dǎo)速度與胸主動(dòng)脈血管壁MMP-9、TIMP-1表達(dá)的關(guān)系統(tǒng)計(jì)分析慢性腎衰竭大鼠模型血管彈性指標(biāo)PWV與

9、胸主動(dòng)脈血管壁MMP-9、TIMP-1表達(dá)的相關(guān)性。兩變量直線相關(guān)分析顯示MMP-9、TIMP-1與PWV呈正相關(guān)，分別為r=0.481，P＜0.05; r=0.493,P＜0.05，胸主動(dòng)脈血管壁上MMP-9、TIMP-1的表達(dá)增多與PWV增快有關(guān)聯(lián)，與血管彈性功能的減退有相關(guān)性。
　　 結(jié)論:
　　 1.從模型組大鼠腎臟組織的病理改變及模型組與假手術(shù)組間血肌酐和尿素氮升高的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可以說明通過5/6腎切除術(shù)構(gòu)建慢