大黃素、槲皮素對平滑肌及其肌球蛋白功能的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、本研究利用離體腸管模型，觀察大黃素和槲皮素對平滑肌的直接影響。 本文在研究大黃素和槲皮素作用的分子機(jī)制時(shí)，把肌球蛋白酶活性和肌球蛋白磷酸化程度作為兩個(gè)主要測試指標(biāo)，觀察大黃素和槲皮素對肌球蛋白功能的影響。除了考察、比較大黃素和槲皮素分別對肌球蛋白功能的影響，以下幾點(diǎn)促使我們考慮將大黃素和槲皮素聯(lián)合應(yīng)用。(1)一些中藥中同時(shí)含有大黃素和槲皮素兩種成分，如高良姜，枳棋子，紫苑酚等。(2)大黃素和槲皮素同為多種蛋白激酶的抑制劑，例如兩

2、者都有抑制蛋白激酶C和蛋白激酶CK2的作用，(3)大黃素和槲皮素都有舒張血管平滑肌的作用；(4)大黃素具有興奮、槲皮素抑制胃腸道平滑肌的作用。 根據(jù)以上這些信息，我們認(rèn)為比較大黃素和槲皮素對肌球蛋白的作用特點(diǎn)及大黃素和槲皮素合用對肌球蛋白功能的調(diào)節(jié)特征是又有一定理論與實(shí)踐意義的。本實(shí)驗(yàn)為今后進(jìn)一步深入研究了大黃素和槲皮素對平滑肌的作用的機(jī)制，可能的臨床應(yīng)用提示了新的途徑。 一.大黃素、槲皮素對平滑肌的調(diào)節(jié)作用本研究應(yīng)用B

3、L-2410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄、采用不同鈣離子濃度的Kreb液研究大黃素和槲皮素對家兔離體腸管的直接作用。結(jié)果顯示，(1)大黃素對腸平滑肌的作用與劑量相關(guān)，且呈雙向關(guān)系。當(dāng)大黃素濃度＜32μmol/L時(shí)收縮作用隨劑量增加而增強(qiáng)，當(dāng)大黃素濃度＞32μmol/L時(shí)其作用隨劑量增大逐漸減弱。大黃素作用與鈣離子濃度密切相關(guān)，在低鈣溶液條件下，收縮作用明顯減弱，在無鈣條件下，觀察不到收縮作用。(2)預(yù)先給與高鈣溶液，使腸平滑肌處于強(qiáng)烈收縮狀態(tài)，

4、加入槲皮素后出現(xiàn)抑制作用，且隨著劑量加大，抑制作用增強(qiáng)，呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性。以上結(jié)果表明，大黃素和槲皮素對腸平滑肌具有直接的收縮和舒張的作用，此作用與鈣離子密切相關(guān)。 二.大黃素、槲皮素對平滑肌肌球蛋白的調(diào)節(jié)作用肌球蛋白和MLCK均從新鮮雞胃平滑肌組織中提取純化，肌動(dòng)蛋白從雞骨骼肌丙酮干粉中提取分離。以Glycerol-PAGE及ScoinImage密度掃描軟件檢測肌球蛋白磷酸化程度，用分光光度法測定肌球蛋白Mg2+-ATPa

5、se活性。研究結(jié)果指出：(1)在肌動(dòng)蛋白存在及不存在兩種條件下，大黃素可濃度依賴性的增加磷酸化肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性；槲皮素可濃度依賴性的抑制磷酸化肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性，而對未磷酸化的肌球蛋白沒有作用。(2)大黃素可濃度依賴性增加肌球蛋白磷酸化程度；槲皮素可濃度依賴性抑制肌球蛋白磷酸化程度。這些結(jié)果與大黃素及槲皮素對磷酸化肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性的作用是一致的。(3)大黃素和槲皮素聯(lián)合應(yīng)用對磷酸化的肌球蛋白Mg2

6、+-ATP酶活性和肌球蛋白磷酸化程度具有雙向調(diào)節(jié)作用；即對于部分磷酸化肌球蛋白，可起到增強(qiáng)肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性和肌球蛋白磷酸化程度的作用，而對于完全磷酸化的肌球蛋白，則起到抑制肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性和肌球蛋白磷酸化程度的作用。(4)MLCK抑制劑ML-9抑制所有大黃素和槲皮素對肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性和肌球蛋白磷酸化程度調(diào)節(jié)作用。 以上結(jié)果表明，大黃素和槲皮素通過作用于肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性