四川地區(qū)傘滑刃屬線蟲種類鑒定及其致病性研究.pdf

1、傘滑刃屬線蟲（Bursaphelenchusspp.)尤其是松材線蟲(busaphelenchusxylophilius)是重要的森林病原線蟲。該病具有寄主范圍廣，發(fā)病速度快，傳播途徑多和防治難度大等特點(diǎn)，被稱為松樹上的癌癥。在防治和檢疫工作中都需要對(duì)該類線蟲進(jìn)行準(zhǔn)確和快速的鑒定，但在日常檢驗(yàn)工作中還常常查獲同屬于傘滑刃屬(Bursaphelenchusspp.)的多種與之形態(tài)非常相似的線蟲，給鑒定工作帶來一定的難度。本研究以四川地區(qū)枯

2、死松木查獲的傘滑刃屬線蟲為研究材料，通過形態(tài)學(xué)測定、PCR-RFLP及ITS區(qū)序列測定等方法對(duì)查獲線蟲進(jìn)行了鑒定，并且對(duì)其治病性進(jìn)行初步研究，主要研究結(jié)果如下： (1)對(duì)病死松木中所獲傘滑刃屬線蟲分離純培養(yǎng)后，通過顯微測量及deman公式計(jì)算所獲線蟲的V、A、b等相關(guān)部位數(shù)值，并對(duì)其形態(tài)特征進(jìn)行描述。結(jié)果顯示在樣本中共分離到六種傘滑刃屬線蟲，分別為松材線蟲(Busaphelenchusxylophilius(Steiner&Bu

3、hrer,1934)Nickle,1970)，擬松材線蟲(B.mucronatusMamiya，1979)、萊魯爾夫線蟲(B.rainulfiBraassch,2002)、變異傘滑刃線蟲(B.aberrans)、霍夫曼傘滑刃線蟲(B.hofumanni)；泰國傘滑刃線蟲(B.thailandae)。 (2)在ITS-RFLP(Restrictionfragmentlengthpolymorphisim)研究中，采用單條線蟲基因組

4、DNA的提取方法，以確?；蚪MDNA的純度，并以傘滑刃屬線蟲ITS區(qū)通用引物P1:5’-CGTAACAAGGTAGCTGTAG-3’，P2:5’-TTTCACTCGCCGTTACTAAGG-3’分別對(duì)分離得到的線蟲進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示，所獲線蟲均得到約900bp左右的擴(kuò)增片段，再利用AluI、HhaI、SalI、DraI四種限制性內(nèi)切酶分別對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切鑒定。結(jié)果表明，四種內(nèi)切酶除SalI外都能區(qū)分松材線蟲和擬松

5、材線蟲，AluI、HhaI、DraI三種內(nèi)切酶還能同時(shí)區(qū)分其它四種傘滑刃屬線蟲。此外通過對(duì)松材線蟲和擬松材線蟲種群rDNA中ITS1、5.8S、ITS2區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)克隆并測序，然后進(jìn)行序列分析及同源性比對(duì)，結(jié)果鑒定出YA、LS兩個(gè)線蟲種群為松材線蟲；DZ、SN、LX三個(gè)地方的線蟲種群為擬松材線蟲，這也與前部分形態(tài)鑒定相符合。 (3)在對(duì)所獲傘滑刃屬線蟲的致病性研究中，所用接種樹種為3～4年生的馬尾松苗(Pinusma

6、ssoniana)，接種量為3000頭/株，接種一月后每周觀察一次，結(jié)果顯示YA和LS的種群(松材線蟲Barsaphelenchusxylophilus)能使馬尾松致病，癥狀為：接種點(diǎn)至稍1/2長的一段的針葉褐變，且針葉褐變長度小于針葉全長的1/2，發(fā)病級(jí)別為Ⅱ級(jí)。接種其它四個(gè)種群及對(duì)照的馬尾松均未見枯萎現(xiàn)象。分析原因可能為其它傘滑刃屬線蟲無致病性或致病性微弱而沒有表現(xiàn)出致病性，也可能和接種馬尾松的松齡以及四川雅安氣候潮濕，年日照量偏低