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文檔簡介
1、攝食和能量代謝對魚類的生長至關(guān)重要,不適當(dāng)?shù)臄z食和能量代謝會抑制動物生長、延緩青春期、降低動物免疫力,甚至引起動物死亡。而在自然界中,由于各種因素的影響,常常導(dǎo)致魚類在其生活周期面臨食物資源的缺乏而受到饑餓脅迫。瘦素(leptin,LEP)和神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y,NPY)是動物食欲調(diào)節(jié)系統(tǒng)中兩個主要的因子,二者相互作用調(diào)節(jié)動物的攝食和能量代謝。
鰱(Hypophthalmichthys molitrix)隸屬
2、于鯉形目(Cypriniformes)、鯉科(Cyprinidae)、鰱屬(Hypophthalmichthys),是我國傳統(tǒng)養(yǎng)殖的“四大家魚”之一,在我國分布廣泛,年產(chǎn)量高,具有重要的經(jīng)濟價值。本文以鰱為研究對象,開展了其神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y,NPY)基因及三個瘦素相關(guān)基因(leptin,LEP; leptinreceptor, LEPR; leptin receptor overlapping transcript
3、,LEPROT)的克隆,組織表達檢測以及在禁食—恢復(fù)投喂條件下這四個基因在鰱腦和肝臟中的表達特征分析,從分子水平初步探討NPY和LEP對鰱攝食和能量代謝的調(diào)節(jié)作用。本研究的主要實驗結(jié)果如下:
1.鰱神經(jīng)肽Y(NPY)基因的克隆及其在禁食—恢復(fù)投喂條件下的表達特征分析鰱NPY基因cDNA序列全長782 bp,包括5'端非翻譯區(qū)68 bp,3'端非翻譯區(qū)423 bp,開放閱讀框291 bp,編碼96個氨基酸;氨基酸相似性比較和系統(tǒng)
4、進化分析結(jié)果顯示NPY較為保守;NPY在所檢測的13個組織中均有表達,并且在腦垂體中表達量最大;禁食導(dǎo)致NPY mRNA在腦中的表達量顯著上升,恢復(fù)投喂6h后下降到正常水平,表明NPY對鰱攝食有促進作用;在肝臟中,禁食前5d NPY mRNA表達量顯著上升,禁食第7d急劇下降,恢復(fù)投喂4h后下降到正常水平,NPY mRNA在腦和肝臟中表達的組織差異性表明NPY在外周組織中發(fā)揮著與在神經(jīng)系統(tǒng)中不同的作用,但在外周組織中的具體作用機制有待進
5、一步研究。
2.鰱瘦素相關(guān)三個基因的克隆及其在禁食—恢復(fù)投喂條件下的表達特征分析鰱LEPR基因cDNA序列全長為3662 bp,包含3240 bp的開放閱讀框,編碼1079個氨基酸殘基;LEPROT基因cDNA序列全長718 bp,開放閱讀框393 bp,編碼130個氨基酸殘基;氨基酸序列相似性比較表明LEP和LEPR基因在分子進化過程中不保守,與人LEP和LEPR的氨基酸序列同源一致性僅為20.2%和25.9%,LEPROT
6、基因相對較保守;進化樹分析顯示硬骨魚類LEP、LEPR和LEPROT基因均從四足類分化而來;LEP主要在肝臟中表達,LEPR和LEPROT在所檢測的13種組織中幾乎都表達,但在腦垂體中表達量最大;在腦中,禁食期間,LEP、LEPR和LEPROTmRNA的表達顯著上升,恢復(fù)投喂之后急劇下降到基礎(chǔ)水平;肝臟中,3個基因mRNA的表達各異,但各基因的整體表達趨勢均在禁食—恢復(fù)投喂期間有一段下降的過程。
本研究所檢測到的鰱中LEP、L
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