加味四逆散對肝纖維化模型大鼠血清AST-ALT及肝病理變化的影響.pdf

1、　　一 目的
　　研究加味四逆散治療肝纖維化模型大鼠的療效,探討加味四逆散治療肝纖維化的作用機制,為加味四逆散治療肝纖維化提供實驗依據(jù)。
　　觀察加味四逆散對肝纖維化模型大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminot-ransferase,ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(asparatae amintransferease,AST)的影響,以研究加味四逆散治療肝纖維化的肝臟酶學(xué)變化規(guī)律,為加味四逆散治療肝纖維

2、化提供肝臟酶學(xué)變化依據(jù)。
　　觀察加味四逆散對肝纖維化大鼠模型肝組織尿激酶型纖溶酶原激活物( urkin-ase-type plasminigen activator,uPA)和纖溶酶原激活物抑制劑-1(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)的影響,以研究加味四逆散治療肝纖維化的纖溶系統(tǒng)機制,為加味四逆散治療肝纖維化提供病理學(xué)依據(jù)。
　　觀察加味四逆散對肝纖維化模型大鼠肝臟病

3、理變化的影響,以研究加味四逆散治療肝纖維化的病理學(xué)變化,為加味四逆散治療肝纖維化提供病理學(xué)依據(jù)。
　　二 方法
　　72只SPF級Wistar大鼠,雌雄各半,隨機選取12只做空白對照,其余造模分組。按照1：100(v/v)用生理鹽水配置二甲基亞硝胺(N-Nitrosodimethylamine,D MN)稀釋溶液,以10μl/kg每周前3天對大鼠腹腔注射造模,對照組腹腔注射等量生理鹽水,共4周,每周第一天記錄大鼠體重

4、變化。造模結(jié)束后,用隨機數(shù)字表法將大鼠分為模型組,鱉甲軟肝片組,加味四逆散大劑量組,加味四逆散中劑量組和加味四逆散小劑量組。
　　造模結(jié)束,各治療組以200g大鼠和70kg成人按體表面積折算,灌胃給藥,對照組和模型組給予同等生理鹽水灌胃,共給藥21天。實驗結(jié)束,麻醉大鼠,摘眼球取血,檢測血清學(xué)指標(biāo)。解剖大鼠并肉眼觀察腹水量、清晰度、性質(zhì)及肝臟變化,并取肝臟左前葉,PBS緩沖液固定,蘇木精—伊紅(hematoxylin-esos

5、instai-ning,HE)染色及免疫組織化學(xué)染色。
　　三 結(jié)果
　　加味四逆散大、中、小劑量均可降低二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的肝纖維化模型大鼠血清AST和ALT。加味四逆散大劑量組療效更接近對照組,各治療組與對照組比較,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　加味四逆散大、中、小劑量均可降低二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的肝纖維化模型大鼠肝組織uPA,模型組大鼠uPA和PAI-1顯著升高,各治療組與模型組比較,uPA 和PA

6、I-1下降,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　HE染色顯示,對照組大鼠肝臟結(jié)構(gòu)完整；模型組肝小葉正常結(jié)構(gòu)被破壞,膠原纖維沿界板破壞處向肝小葉內(nèi)延伸,多數(shù)形成假小葉,可見范圍不一、程度不等的肝組織壞死區(qū),中央或局部出現(xiàn)炎性細胞浸潤；加味四逆散大劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)稍有破壞,大部分肝細胞整齊排列,有少量炎癥細胞浸潤,匯管區(qū)有纖維沉積；加味四逆散中劑量組肝細胞整齊排列,炎癥細胞浸潤明顯,標(biāo)本可見腹水；加味四逆散小劑量組可見纖維沉積于

7、匯管區(qū),炎癥細胞浸潤相對增多,肝細胞排列紊亂。
　　免疫組織化學(xué)法染色顯示,對照組肝組織中,未見uPA、PAI-1陽性表達,模型組的肝組織鏡檢發(fā)現(xiàn),uPA主要分布于假小葉及增生的纖維間隔,PAI-1陽性多見于肝纖維化活躍的匯管區(qū),肝細胞變性壞死處,PAI-1隨著肝纖維化的程度增加而陽性表達更明顯,uPA則相對不足,加味四逆散大劑量組的肝組織uPA陽性染色較其他組增多。
　　四 結(jié)論
　　二甲基亞硝胺可以成功