云南省瀾滄江流域蚊蟲及蚊媒病毒調查研究.pdf

1、云南省是我國蚊類區(qū)系和物種分布的核心地帶和關鍵地區(qū)，也是我國蚊媒傳染病較多的省份。迄今為止，在云南從蚊蟲中分離并已鑒定的病毒包括5個病毒科11種病毒，包括披膜病毒科甲病毒屬的辛德畢斯病毒、基孔肯雅病毒、蓋塔病毒，黃病毒科黃病毒屬的乙腦病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）、登革病毒(Dengue virus，DENV)，呼腸孤病毒科的云南環(huán)狀病毒(Yunnan orbivirus，YUOV)、Colti病

2、毒、Kadipiro病毒、版納病毒(Banna virus，BAV)，細小病毒科濃核病毒屬的濃核病毒，布尼亞病毒科布尼亞病毒屬的巴泰病毒。在云南已從15種蚊蟲中分離到乙腦病毒。瀾滄江在云南省境內1247km，縱貫云南南北。流域面積約90000km2，是我國蚊類區(qū)系和蚊種分布的核心地帶和關鍵地區(qū)之一。以往開展蚊蟲及蚊媒病毒的調查多集中于滇西南邊境地區(qū)，在滇西北地區(qū)開展的調查較少。隨著全球氣候變曖、人口流動增加、人們的生產(chǎn)生活方式改變以及瀾

3、滄江—湄公河國際航運的開通，有必要對云南省瀾滄江流域蚊蟲分布及其與疾病的關系進行系統(tǒng)的調查研究。
　　2007-2009年，在云南省瀾滄江上、中、下流域共選擇10個居民點進行蚊蟲分布調查，在蚊蟲密度高峰季節(jié)，采用誘蚊燈法在畜圈和人房內進行夜間捕蚊。并于2010年，在下游地區(qū)村寨竹林采集伊蚊。對采集的蚊蟲標本用白紋伊蚊C6/36細胞進行病毒分離、分子生物學鑒定和系統(tǒng)進化分析。同時收集疑似病人血清和腦脊液標本進行病毒分離和分子生物學鑒

4、定。
　　調查結果顯示，瀾滄江流域居民點畜圈共采集到8屬40種共計112344只蚊蟲。其中構成比在前四位的蚊蟲依次是三帶喙庫蚊(80.26％)、中華按蚊(8.35％)、環(huán)帶庫蚊(5.41％)和紋腿庫蚊(2.42％)，其余36種蚊蟲的構成比均小于1.00％。在人房中共采集到7屬32種4427只蚊蟲，蚊蟲構成比在前四位的蚊蟲依次是三帶喙庫蚊(35.71％)、中華按蚊(27.51％)、紋腿庫蚊(10.68％)、騷擾阿蚊(3.55％)。在

5、上游地區(qū)畜圈中共采集到6屬20種蚊蟲，其中構成比在前四位的蚊蟲依次是紋腿庫蚊(36.47％)、三帶喙庫蚊(30.63％)、中華按蚊(14.85％)和昆明按蚊(11.63％)。人房中共采集到4屬6種蚊蟲，構成比在前四位的蚊蟲依次是騷擾阿蚊(29.41％)、致倦庫蚊(23.53％)、中華按蚊(17.65％)、多斑按蚊和白胸庫蚊(11.76％);在中游地區(qū)畜圈共采集到6屬28種蚊蟲，其中構成比在前四位的蚊蟲依次是三帶喙庫蚊(84.03％)、中

6、華按蚊(6.67％)、環(huán)帶庫蚊(5.49％)和紋腿庫蚊(1.26％)。人房中共采集到5屬20種蚊蟲，構成比在前四位的蚊蟲依次是三帶喙庫蚊(36.15％)、中華按蚊(29.09％)、紋腿庫蚊(12.15％)、致倦庫蚊(11.82％);在下游地區(qū)畜圈共采集到7屬35種蚊蟲，其中構成比在前四位的蚊蟲依次是三帶喙庫蚊(77.15％)、中華按蚊(12.53％)、環(huán)帶庫蚊(5.76％)和致倦庫蚊(0.90％)。人房中共采集到6屬25種蚊蟲，排在前四

7、位的蚊蟲依是三帶喙庫蚊(33.59％)、致倦庫蚊(19.69％)、中華按蚊(16.60％)、環(huán)帶庫蚊(8.49％)。
　　對云南瀾滄江流域10個縣采集到的共14706只193組蚊蟲標本進行病毒分離，共獲得55株有細胞病變的病毒分離物，對11份腦脊液標本、23份發(fā)熱病人血清進行病毒分離，獲得1株有細胞病變的病毒分離物。
　　采用特異引物或通用引物對49株分離物進行RT-PCR鑒定，有40株分離物得到鑒定，仍有9株為未知分離物。

8、40株分離物中包括5科（黃病毒科、披膜病毒科、呼腸孤病毒科、Toii病毒科、Mesoniviridae病毒科）8種病毒（乙腦病毒11株、庫蚊黃病毒6株、伊蚊黃病毒6株、蓋塔病毒5株、版納病毒3株、云南環(huán)狀病毒5株、Toti病毒6株、Alphamesonivirus1樣病毒1株），其中蚊蟲黃病毒、Toti病毒、Alphamesonivirus1樣病毒為云南首次分離到。40株分離物中，有2株同時檢測到BAV和Toti病毒、1株同時檢測到庫蚊

9、黃病毒和Toti病毒。8種病毒主要來自三帶喙庫蚊、中華按蚊及白紋伊蚊。從三帶喙庫蚊中分離到7種病毒（JEV、BAV、YUOV、GETV、Alphamesonivirus1樣病毒、庫蚊黃病毒、Toti病毒），從中華按蚊中分離到3種病毒（JEV、GETV、庫蚊黃病毒）。首次從老撾輸入病例血清標本中分離到1株登革2型病毒。
　　11株JEV的蚊蟲采集地區(qū)分布在云南瀾滄江流域的上、中、下游地區(qū)，瀾滄江上、中、下游地區(qū)三帶喙庫蚊乙腦病毒的最

10、低感染率分別為24.63/萬、7.15/萬和9.02/萬。新分離JEV的外膜蛋白(E)基因核苷酸相似性為98.0％～100.0％，氨基酸同源性為99.8％～100.0％，與我國乙腦減毒活疫苗株SA14-14-2的核苷酸相似性為86.1％～86.9％，氨基酸相似性為96.8％～97.2％。系統(tǒng)進化分析顯示，新分離10株JEV均屬于基因Ⅰ型。
　　從瀾滄江上、中、下游地區(qū)采集的三帶喙庫蚊、中華按蚊和白紋伊蚊及未分類伊蚊中鑒定到12株黃

11、病毒。對12株黃病毒部分非結構蛋白5(NS5)基因進行進化分析，庫蚊和按蚊與伊蚊分離到的病毒分別位于不同的分枝，庫蚊和按蚊中分離到的病毒與庫蚊黃病毒(Culex flavivirus，CxFV)進化關系相近，而從伊蚊中分離到的黃病毒與CFA病毒(Cell fusing agent virus，CFA)和Kamiti河病毒(Kamiti River virus，KRV)相近，但位于不同分枝中。
　　在瀾滄江中游地區(qū)采集的三帶喙庫蚊中

12、首次分離到6株Toti病毒。對該病毒編碼RNA依賴的RNA聚合酶基因的部分氨基酸進行進化分析顯示，新分離Toti病毒和尚未分類的病毒Omono River virus AK4株和ToV-TJ株同在一個進化分支。屬于Totivirus病毒科尚未分類病毒。
　　在瀾滄江中游地區(qū)采集的三帶喙庫蚊中首次分離到1株Alphamesonivirus1樣病毒，命名為NDiV-NJ8-09。系統(tǒng)進化樹顯示，新分離株NDiV-NJ8-09與NDiV

13、02VN178和Cavally virus(CAVV)共同位于同一進化分枝，關系最近，屬于套式病毒目(order Nidovirales) Mesoniviridae病毒科。
　　在瀾滄江中游地區(qū)南澗縣采集的三帶喙庫蚊中鑒定出3株BAV，在瀾滄江下游地區(qū)采集的三帶喙庫蚊中鑒定到5株YUOV，在瀾滄江上游和下游采集的三帶喙庫蚊和中華按蚊中鑒定到5株GETV。經(jīng)BLAST比對顯示，分別與以往在云南分離到的相應病毒具有很高的相似性。

14、r>　　對新分離的登革病毒MLDENV-09株E基因核苷酸序列進行進化分析，結果顯示該病毒株位于2型登革病毒亞洲基因Ⅰ型拓撲群中。與2006年泰國株D2/Thailand/0606aTw的E基因核苷酸相似性為99.6％。
　　本研究首次在云南省瀾滄江流域系統(tǒng)地進行了蚊蟲和蚊媒病毒的流行病學調查，結果提示云南省瀾滄江流域不僅存在蚊種的多樣性分布，也同時存在蚊媒病毒的多樣性。具體得出以下結論:
　　1.三帶喙庫蚊和中華按蚊在瀾滄

15、江上、中、下游地區(qū)畜圈中均是優(yōu)勢蚊種。三帶喙庫蚊和中華按蚊是瀾滄江中、下游地區(qū)人房中的優(yōu)勢蚊種。該地區(qū)蚊蟲種類從高緯度地區(qū)向低緯度地區(qū)逐漸增多。
　　2.三帶喙庫蚊是自然感染病毒種類最多的蚊種，從三帶喙庫蚊中分離到7種病毒（JEV、BAV、YUOV、GETV、Alphamesonivirus1樣病毒、庫蚊黃病毒、Toti病毒）。其次，從中華按蚊中分離到3種病毒（JEV、GETV、庫蚊黃病毒）。本次調查提示瀾滄江流域居民點廣泛存在蟲

16、媒病毒性疾病的媒介。
　　3.在云南首次從三帶喙庫蚊中分離到蚊蟲黃病毒、Toti病毒和Alphamesonivirus1樣病毒，它們的生物學性狀與人類疾病關系需進一步研究。
　　4.在瀾滄江中游地區(qū)分離到BAV，結合以往調查數(shù)據(jù)，提示BAV在整個瀾滄江流域均有分布。JEV在瀾滄江流域廣泛分布。由于這兩種病毒與人類疾病關系密切，提示應加強居民點蚊蟲媒介控制措施，以確保居民健康。
　　5.GETV是導致家畜疾病的病原，本次