葛根素對mESC-CMs超微結(jié)構(gòu)與肌漿網(wǎng)鈣操縱功能發(fā)育的影響.pdf

1、目的：心肌細(xì)胞是終末分化細(xì)胞，受損后不能再生。胚胎干細(xì)胞源的心肌細(xì)胞(embryonic stem cells-derived cardiomyocytes, ESC-CMs)是修復(fù)受損心肌最有前景的細(xì)胞源之一，具有合適的結(jié)構(gòu)和功能是移植后ESC-CMs與宿主細(xì)胞發(fā)生功能整合的前提。然而，ESC-CMs卻表現(xiàn)出不成熟的結(jié)構(gòu)和肌漿網(wǎng)功能特征，這會(huì)影響其對心功能的修復(fù)效果。本研究的目的主要是探討中藥單體葛根素對小鼠ESC-CMs(murin

2、e ESC-CMs，mESC-CMs)超微結(jié)構(gòu)發(fā)育和鈣操縱功能發(fā)育的影響。
　　方法：將D3系小鼠胚胎干細(xì)胞(murine embryonic stem cells, mESCs)作為研究心肌細(xì)胞發(fā)育的離體模型。采用經(jīng)典的懸滴－懸?。N壁三步法誘導(dǎo)mESCs向心肌細(xì)胞分化，并在分化過程中持續(xù)使用葛根素（puerarin，100μmol/L）處理。分別收集分化第10、16、20天的跳動(dòng)胚體進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用掃描電鏡觀察mESC-CM

3、s的超微結(jié)構(gòu)；共聚焦鈣成像記錄細(xì)胞內(nèi)鈣瞬變；全細(xì)胞膜片鉗記錄L型鈣電流；RT-PCR和 real-time PCR測定鈣操縱相關(guān)蛋白的mRNA和microRNAs的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：(1)葛根素促進(jìn) mESC-CMs肌原纖維的發(fā)育；(2)葛根素增加mESC-CMs自發(fā)性內(nèi)鈣瞬變的幅度，加快鈣離子回收速率；(3)葛根素顯著增加mESC-CMs肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣的儲(chǔ)存；(4)葛根素顯著上調(diào)鈣操縱核心蛋白肌漿網(wǎng)鈣泵2a、貯鈣素和三聯(lián)素的基因