膀胱癌中長鏈非編碼RNA表達(dá)譜及其作用機制研究.pdf

1、背景：長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA，lncRNA;轉(zhuǎn)錄本長度200nt-10Kb)最初被認(rèn)為是RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄的副產(chǎn)物，并不具有任何生物學(xué)功能。但最近的研究表明，在多種腫瘤中都存在著lncRNA的異常表達(dá)，并且與腫瘤的生物學(xué)行為及預(yù)后密切相關(guān)。然而相對于目前篩查出的數(shù)萬條lncRNA而言，已經(jīng)鑒定出功能和作用機制的lncRNA僅占很小一部分。膀胱癌中l(wèi)ncRNA的表達(dá)情況及其可能的作用機制目前仍不清楚。

2、r>　　目的：闡明膀胱癌中l(wèi)ncRNA的表達(dá)情況及其可能的作用機制。
　　方法：⑴選取膀胱尿路上皮癌及配對的癌旁組織5對，通過Array star公司的lncRNA芯片進(jìn)行膀胱癌中l(wèi)ncRNA的表達(dá)譜研究。⑵通過生物信息學(xué)分析篩選出差異表達(dá)的lncRNA和mRNA，并進(jìn)行基因功能分析和信號通路分析，最后構(gòu)建基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)。⑶在差異表達(dá)最明顯的LncRNAs中隨機選擇4條(TNXA，CTA-134P22.2，CTC-276P9.1和

3、KRT19P3)，通過qRT-PCR在50對癌和癌旁組織中進(jìn)行驗證。⑷從篩選出的差異表達(dá)表達(dá)的lncRNA中選出LOC572558進(jìn)行后續(xù)的功能實驗。我們首先構(gòu)建了過表達(dá)LOC572558的膀胱癌細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株，接下來通過CCK-8實驗檢測細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和凋亡，劃痕實驗和Transwell實驗檢測遷移和侵襲，來探討過表達(dá)LOC572558對膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。⑷通過磷酸化蛋白芯片和western-blot檢測并驗證

4、過表達(dá)LOC572558后多條信號通路中蛋白磷酸化水平的變化，并通過生物信息學(xué)分析總結(jié)LOC572558是通過哪些信號通路中的關(guān)鍵蛋白發(fā)揮其調(diào)控作用的。
　　結(jié)果：①發(fā)現(xiàn)了3324條差異表達(dá)的LncRNA（在癌和癌旁組織差異表達(dá)2倍以上），其中明顯表達(dá)差異的LncRNA為110條（差異表達(dá)8倍以上），包括88條表達(dá)下調(diào)和22條表達(dá)上調(diào)的LncRNA。②通過生物信息學(xué)分析我們發(fā)現(xiàn)這些異常表達(dá)的LncRNA可能與膀胱癌的發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)

5、，其功能可能是通過調(diào)控P53、細(xì)胞周期或者PPAR信號通路中的蛋白而實現(xiàn)的。③過表達(dá)LOC572558可以抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)發(fā)生晚期凋亡為主的凋亡，抑制膀胱癌細(xì)胞的侵襲和遷移，并使細(xì)胞周期阻滯于S期。④以15％為cutoff值，我們通過蛋白磷酸化芯片發(fā)現(xiàn)過表達(dá)LOC572558可以上調(diào)38個蛋白以及下調(diào)61個的蛋白磷酸化水平。生物信息學(xué)分析和Western-blot驗證表明p53和CREB是LOC572558發(fā)揮調(diào)控作用的關(guān)鍵基