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文檔簡介
1、棉花是世界上重要的經(jīng)濟(jì)作物。棉纖維作為棉花的主要產(chǎn)品,已經(jīng)成為紡織業(yè)的重要原料之一,紡織品的質(zhì)量和效益取決于棉纖維的品質(zhì)。因此,棉花分子育種研究的首要任務(wù)是提高棉纖維品質(zhì)。棉纖維是由棉花胚珠表皮細(xì)胞分化和發(fā)育形成的單細(xì)胞,其伸長率和最終長度遠(yuǎn)超過其它植物細(xì)胞,是研究植物細(xì)胞伸長和細(xì)胞壁生物合成的理想模型。棉纖維發(fā)育相關(guān)基因的克隆及其分子機(jī)制的研究,為利用基因工程技術(shù)提高棉纖維品質(zhì)提供重要的理論依據(jù)和應(yīng)用價(jià)值。富含脯氨酸蛋白(prolin
2、-rich protein)是一類富含脯氨酸和羥脯氨酸的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)蛋白,它不僅能夠抵御外界病原菌的侵害、響應(yīng)激素誘導(dǎo)和非生物脅迫,還能夠調(diào)控植物的生長發(fā)育。本研究利用電子克隆結(jié)合RT-PCR技術(shù),從12DPA(開花后天數(shù))棉纖維中克隆到一個(gè)編碼富含脯氨酸蛋白(proline-rich proteins,PRPs)基因,命名為GhPRP10(登錄號KP036633)。研究該基因在棉花不同組織中的表達(dá)情況,通過轉(zhuǎn)化不同模式生物進(jìn)行表型觀察,
3、對該基因的功能進(jìn)行了分析。
本研究主要內(nèi)容包括:⑴該基因具有687bp的開放閱讀框,共編碼228個(gè)氨基酸,其中脯氨酸(Pro)含量為34.6%。序列分析發(fā)現(xiàn) GhPRP10蛋白具有N端信號肽和富含脯氨酸區(qū)域,屬于第一類PRPs。⑵實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR)結(jié)果顯示,GhPRP10在棉纖維組織中優(yōu)勢表達(dá),且受棉纖維發(fā)育調(diào)控,在纖維發(fā)育過程中的表達(dá)量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢,在18DP
4、A纖維中表達(dá)量最高,在21-27DPA纖維中表達(dá)量保持較高水平。因此推測該基因在纖維伸長和次生壁合成過程中發(fā)揮作用。⑶為進(jìn)一步研究 GhPRP10基因在棉花纖維發(fā)育過程中功能,通過Gateway技術(shù)構(gòu)建植物過量表達(dá)載體,并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法分別轉(zhuǎn)化煙草 BY-2懸浮細(xì)胞、SR1煙草、哥倫比亞擬南芥(Columbia)。通過觀察BY-2細(xì)胞形態(tài)和測量細(xì)胞長度,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因 BY-2細(xì)胞顯著長于野生型細(xì)胞,表明該基因能夠促進(jìn)細(xì)胞伸
5、長。通過測定擬南芥根長和植株葉面積,數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因擬南芥的整個(gè)植株的葉面積顯著大于野生型的葉面積,轉(zhuǎn)基因株系擬南芥根顯著長于野生型,表明該基因不僅能夠促進(jìn)葉片的生長發(fā)育,而且能夠促進(jìn)擬南芥的根毛伸長,從而確定該基因在植物的生長發(fā)育方面發(fā)揮作用。構(gòu)建綠色熒光蛋白 GFP融合載體,通過煙草葉片的瞬時(shí)表達(dá)顯示該基因定位在細(xì)胞邊緣。將干擾載體和過量表達(dá)載體轉(zhuǎn)化棉花 YZ-1,獲得抗性植株,為進(jìn)一步研究該基因在棉纖維中的功能奠
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