MicroPET-CT腦顯像評價中西藥治療帕金森病模型鼠的療效及對比研究.pdf

1、目的:本研究旨在通過應(yīng)用Micro PET/CT腦顯像評價左旋多巴、姜黃素及中西藥聯(lián)合治療帕金森病(Parkinson's disease，PD)模型大鼠療效，并監(jiān)測、評價三者在治療PD大鼠模型的療效差異，探討各類藥物對PD大鼠的保護(hù)作用及機制，為篩選臨床治療PD藥物提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1偏側(cè)PD大鼠模型制備
　　隨機選取清潔級、健康成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠，體重210-240g。以

2、10％的水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，依據(jù)大鼠腦立體定位圖譜，借助實驗動物腦立體定位儀，采用單側(cè)雙點毀損法將6-羥基多巴胺(6-hydroxy dopamine，6-OHDA)注入大鼠腦右側(cè)黑質(zhì)致密部（substantianigra compacta，SNc）和中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(ventral tegmental area，VTA)，制作偏側(cè)PD大鼠模型。
　　2行為學(xué)測試及Micro PET/CT顯像
　　于術(shù)后第3周腹腔注射阿

3、撲嗎啡（Apomorphine，APO）誘發(fā)大鼠的旋轉(zhuǎn)行為，選擇安靜、黑暗的環(huán)境，于注射后5min人工計數(shù)30min內(nèi)大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)，以恒定向左側(cè)（健側(cè)）旋轉(zhuǎn)的總轉(zhuǎn)數(shù)＞210r/30min(平均旋轉(zhuǎn)圈數(shù)≥7r/min)視為成功模型。選擇成模大鼠，分兩天分別進(jìn)行多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白(dopamine transporter, DAT)11C-CFT顯像和雷氯必利(11C-Raclopride，11C-RAC)多巴胺D2受體顯像，并勾畫右側(cè)（毀損側(cè)

4、）紋狀體及小腦部位的感興趣區(qū)(region of interest，ROD。11C-CFT顯像示成模大鼠腦右側(cè)紋狀體放射性攝取明顯減低，左側(cè)攝取顯像劑基本正常;11C-RAC顯像示成模大鼠腦右側(cè)紋狀體放射性攝取較左側(cè)明顯增強。
　　3實驗分組及給藥
　　將成功PD模型大鼠隨機分為左旋多巴組、姜黃素組、中西藥聯(lián)合治療組和自然恢復(fù)組，每組各22只。左旋多巴組將左旋多巴溶液（左旋多巴10 mg/kg+芐絲肼2.5 mg/kg，溶于

5、0.9％生理鹽水中），于每日上午9:00-10:00腹腔注射給藥一次;姜黃素組于同一時間點用姜黃素(劑量為100mg/kg，藥物溶液體積為10ml/kg)灌胃一次;中西藥聯(lián)合治療組于每日同一時間通過腹腔注射和灌胃法給予等體積的左旋多巴和姜黃素，連續(xù)8周。自然恢復(fù)組不做任何處理。
　　4實驗評估
　　4.1 Micro PET/CT掃描
　　各組大鼠分別行11-CFT及11C-RAC（隔日）Micro PET/CT腦顯像

6、。觀察大鼠右側(cè)（毀損側(cè)）腦紋狀體部位對顯像劑的攝取情況，勾畫右側(cè)（毀損側(cè)）紋狀體及小腦部位ROI，測量其放射性計數(shù)，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析比較。
　　4.2氧化應(yīng)激(oxidative stress)
　　每組大鼠各取10只，10％水合氯醛腹腔注射麻醉后斷頭取腦處死，剝離出右側(cè)（毀損側(cè)）腦組織、稱重，生理鹽水制成10％的組織勻漿，離心，取上清液，預(yù)處理后放在-20℃冰箱保存。檢測谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione perox

7、idase，GSH-PX)活力、丙二醛(Maleic Dialdehyde，MDA)含量及超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)活力。
　　4.3免疫組織化學(xué)染色(Immunohistochemical staining，IHC)
　　每組大鼠各取6只，10％的水合氯醛腹腔注射深度麻醉后斷頭取腦處死，剝離出右側(cè)（毀損側(cè)）腦組織后，對大鼠右側(cè)（毀損側(cè)）腦黑質(zhì)紋狀體區(qū)行連續(xù)冠狀石蠟切片。按Hsu的AB

8、C方法，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，檢測大鼠右側(cè)（毀損側(cè)）腦紋狀體內(nèi)酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase，TH)陽性細(xì)胞數(shù)目的變化情況。
　　4.4高效液相色譜法(High performance liquid chromatography HPLC)
　　每組大鼠各取6只，10％的水合氯醛腹腔注射麻醉后斷頭取腦處死，分離出大鼠右側(cè)（毀損側(cè)）腦紋狀體，生理鹽水制成10％的組織勻漿，離心，取上清液，預(yù)處理后放在-8

9、0℃冰箱保存。根據(jù)色譜峰面積計算大鼠右側(cè)（毀損側(cè)）腦紋狀體內(nèi)多巴胺(dopamine，DA)及其代謝物二羥基苯乙酸(dihydroxyphenylacetic acid，DOPAC)、高香草酸(homovanillic acid，HVA)的含量。
　　結(jié)果:
　　1 Micro PET/CT顯像右側(cè)（毀損側(cè)）紋狀體/小腦(rST/CB)攝取比值的定量分析
　　1.111C-CFT顯像
　　1.1.1治療前后比較<

10、br>　　①與治療前比較，中西藥聯(lián)合治療組、左旋多巴組、姜黃素組大鼠經(jīng)治療4周后rST/CB比值均高于治療前（P＜0.05），經(jīng)治療8周后rST/CB比值高于治療前（P＜0.05）及治療4周組(P＜0.05)。
　　②自然恢復(fù)組大鼠治療前rST/CB比值與自然恢復(fù)4周后及8周后比較均無差異(P＞0.05)。
　　1.1.2組間比較
　　①治療4周后:中西藥聯(lián)合治療組高于左旋多巴組、姜黃素組及自然恢復(fù)組(P＜0.05);

11、左旋多巴組高于自然恢復(fù)組(P＜0.05);姜黃素組高于自然恢復(fù)組(P＜0.05);左旋多巴組與姜黃素組比較無差異(P＞0.05)。
　?、谥委?周后:中西藥聯(lián)合治療組高于左旋多巴組、姜黃素組及自然恢復(fù)組（P＜0.05）;左旋多巴組高于自然恢復(fù)組(P＜0.05);姜黃素組高于自然恢復(fù)組(P＜0.05);左旋多巴組與姜黃素組比較無差異(P＞0.05)。
　　1.211C-RAC顯像
　　1.2.1治療前后比較
　?、?/p>

12、與治療前比較，左旋多巴組、姜黃素組大鼠經(jīng)治療4周后rST/CB比值與治療前比較無差異(P＞0.05);經(jīng)治療8周后rST/CB比值低于治療前(P＜0.05)及治療4周后(P＜0.05);中西藥聯(lián)合治療組大鼠經(jīng)治療4周、8周后rST/CB比值均低于治療前(P＜0.05)及治療4周組（P＜0.05）。
　?、谧匀换謴?fù)組大鼠治療前rST/CB比值與自然恢復(fù)4周后及8周后比較均無差異(P＞0.05)。
　　1.2.2組間比較

13、　?、僦委?周后:左旋多巴組、姜黃素組、自然恢復(fù)組兩兩比較均無差異（P＞0.05）;中西藥聯(lián)合治療組低于左旋多巴組、姜黃素組及自然恢復(fù)組(P＜0.05)。
　?、谥委?周后:中西藥聯(lián)合治療組低于左旋多巴組、姜黃素組及自然恢復(fù)組(P＜0.05);左旋多巴組低于自然恢復(fù)組(P＜0.05);姜黃素組低于自然恢復(fù)組(P＜0.05);姜黃素組與左旋多巴組比較無差異(P＞0.05)。
　　2氧化應(yīng)激
　　與自然恢復(fù)組比較，左旋多巴

14、組、姜黃素組GSH-PX及SOD活性升高， MDA含量降低(P＜0.05);左旋多巴組與姜黃素組比較，兩組SOD活性及MDA含量無差異(P＞0.05)，而姜黃素組GSH-PX的活性比左旋多巴組升高（P＜0.05）。
　　與左旋多巴組比較，中西藥聯(lián)合治療組MDA含量無差異(P＞0.05)，而中西藥聯(lián)合治療組GSH-PX及SOD活性降低(P＜0.05);與姜黃素組比較，中西藥聯(lián)合治療組MDA含量無差異(P＞0.05)，而中西藥聯(lián)合治療

15、組GSH-PX及SOD活性降低(P＜0.05);與自然恢復(fù)組比較，中西藥聯(lián)合治療組MDA含量無差異(P＞0.05)，而中西藥聯(lián)合治療組GSH-PX及SOD活性降低（P＜0.05）。
　　3免疫組織化學(xué)染色
　　與自然恢復(fù)組比較，中西藥聯(lián)合治療組、左旋多巴組、姜黃素組TH陽性細(xì)胞數(shù)目均高于自然恢復(fù)組(P＜0.05）;姜黃素組與左旋多巴組比較，兩組TH陽性細(xì)胞數(shù)目無差異(P＞0.05);與左旋多巴組比較，中西藥聯(lián)合治療組TH陽性

16、細(xì)胞數(shù)目高于左旋多巴組(P＜0.05）;與姜黃素組比較，中西藥聯(lián)合治療組TH陽性細(xì)胞數(shù)目高于姜黃素組(P＜0.05）。
　　4高效液相色譜法
　　與自然恢復(fù)組比較，中西藥聯(lián)合治療組、左旋多巴組、姜黃素組DA及其代謝物DOPAC、HVA含量均增加(P＜0.05);姜黃素組與左旋多巴組比較，兩組DA及其代謝物DOPAC、HVA含量無差異（P＞0.05）;與左旋多巴組比較，中西藥聯(lián)合治療組DA及其代謝物DOPAC、HVA含量高于左

17、旋多巴組(P＜0.05);與姜黃素組比較，中西藥聯(lián)合治療組DA及其代謝物DOPAC、HVA含量高于姜黃素組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1中西藥聯(lián)合治療可以提高PD大鼠模型毀損側(cè)紋狀體多巴胺的含量，且療效優(yōu)于單獨使用中藥或西藥治療。
　　2通過對三種治療方法前后11C-CFT多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白及11C-RAC多巴胺D2受體Micro PET/CT腦顯像對比研究，從分子水平評價了中西藥聯(lián)合治療對PD的療效，且為11C-