向日葵種子純度室內(nèi)快速檢測方法的研究.pdf

1、種子是重要的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料，種子純度是保證農(nóng)作物優(yōu)良品種增產(chǎn)潛力得以發(fā)揮的關(guān)鍵因素，種子純度檢測對保證種子質(zhì)量具有重要意義。向日葵雜交種純度檢測是質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)，傳統(tǒng)的檢測方法在檢測向日葵種子純度中發(fā)揮著重要作用，但傳統(tǒng)的檢測方法也有一定的局限性，使得這些方法不能滿足快速、準確檢測種子純度的目的，因此，急需研究一種簡單、快速的方法檢測向日葵種子純度。本研究在AU-PAGE技術(shù)檢測玉米種子純度方法和玉米種子純度快速分子檢測技術(shù)的基礎(chǔ)上，

2、研究了向日葵種子純度蛋白電泳和SSR分子檢測方法，建立了向日葵種子純度室內(nèi)快速檢測的方法。主要研究結(jié)果如下:
　　1.優(yōu)化改進了向日葵種子蛋白質(zhì)電泳檢測技術(shù)。通過對向日葵種子貯藏蛋白組成進行研究，得出向日葵種子中水溶蛋白譜帶數(shù)最多，且含量最大，鹽溶蛋白次之，其他蛋白最少。因此，利用蛋白電泳鑒定種子純度時應(yīng)以水溶蛋白和鹽溶蛋白為主。通過對向日葵蛋白提取液進行優(yōu)化，得出種子蛋白提取液中加入適量的SDS，可使泳道背景清晰，從而易于讀取分

3、析蛋白譜帶，而且增加了向日葵種子蛋白譜帶的多態(tài)性。優(yōu)化后的蛋白提取液參數(shù)為:18％尿素、12％冰乙酸、3％ TEMED、0.15％-0.2％ SDS、0.05％甲基綠。用優(yōu)化后的AU-PAGE技術(shù)對6個雜交種和9個親本進行鑒別，能夠?qū)㈦s交種及父母本區(qū)分開。以一種新的命名方法對6個向日葵雜交種和9個親本建立了蛋白指紋數(shù)據(jù)庫，使得任意父母本組合都能找到相應(yīng)的特異蛋白帶。
　　2.通過對DNA快速提取法進行優(yōu)化，得到了基于PCR的向日葵

4、半粒種子DNA快速提取方法。研究了提取液濃度，種子與提取液的質(zhì)量體積比，提取時間，DNA模板量對PCR產(chǎn)物的影響，得到了向日葵DNA快速提取法的參數(shù)范圍。從215對SSR引物中篩選得到了100對多態(tài)性高，特異性好的引物，用篩選出的100對SSR引物建立了11個向日葵親本SSR引物數(shù)據(jù)庫。將DNA快速提取法和通用多重PCR技術(shù)結(jié)合，建立了向日葵種子純度SSR快速分子檢測方法。
　　3.對蛋白電泳法、SSR快速分子檢測結(jié)果與田間種植鑒