食管癌患者樹突狀細胞免疫功能的研究.pdf

1、第一部分食管癌患者和健康人外周血中 DCs的免疫表型檢測
　　背景和目的：DCs作為一種專職抗原遞呈細胞,具有獨特的免疫學功能,而該功能取決于 DCs的免疫狀態(tài),尤其是其成熟分化的程度及主要組織相容性抗原復合物-Ⅱ(MHC-Ⅱ)和分子 B7分子等免疫分子的表達狀況。一般認為腫瘤相關抗原(TAA)只有在MHC-Ⅱ的限制下才又可能激活 T1淋巴細胞,從而啟動宿主免疫系統(tǒng),產生特異抗腫瘤免疫反應。而這一過程必須在 B7等第二信號分子的輔

2、助下才能順利完成。DCs表面 MHC-Ⅱ及 B7分子表達低下或缺失將導致 DCs免疫功能低下或免疫無能。我們擬通過分離食管癌患者和正常人外周血中單個核細胞(PBMNC),在GM-CSF和IL-4細胞因子的刺激下,培養(yǎng)7天收集DCs并檢測其表面CD83、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)等分子的表達。
　　材料和方法：食管癌患者及與之匹配健康人各5例,各取外周靜脈血20ml,采用 Thomas法,分離及培養(yǎng) DCs。培養(yǎng)過程

3、中,倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化。培養(yǎng)7天后,收集DCs,透射電鏡觀察DCs形態(tài),采用流式細胞儀檢測DCs表面CD83、CD80、CD86等分子的表達。用液閃計數(shù)儀觀察DCs對T細胞的增殖作用。
　　結果：在細胞因子的刺激下,培養(yǎng)7天后通過倒置相差顯微鏡和透射電鏡可以見到典型的 DCs形態(tài)。與正常對照組相比,由食管癌患者外周血培養(yǎng)而來的 DCs表達較低的 CD80(41.76±7.35 VS61.41±7.47,P<0.05)和

4、CD86(29.68±7.32 VS37.28±6.75,P<0.05),但是反映 DCs成熟狀態(tài)的 CD83分子在兩組中沒有統(tǒng)計學差別(4.44±1.17 VS5.18±1.59,P>0.05);其誘導T細胞增殖能力每分鐘液閃計數(shù) cpm為10000±2000,明顯低于正常人組( cpm為30000±3000),P<0.01。
　　結論：1.本研究發(fā)現(xiàn),在細胞因子 GM-CSF和 IL-4聯(lián)合誘導下,食管癌患者外周血DCs表面C

5、D80、CD86分子的表達水平明顯低于正常人水平,其刺激 T細胞增殖能力亦低于正常人。2.無論是食管癌患者,還是正常人,經GM-CSF和IL-4聯(lián)合誘導后,都極少表達反映成熟、有活性DCs標記物CD83,表明通過此法獲得的是處于未成熟狀態(tài)的DCs。
　　組織標本 CD83,CD80,CD86及 S-100表達的檢測
　　背景和目的：在參與T細胞激活的諸多協(xié)同刺激分子中,最重要的是T細胞表面CD28分子與APC表面相應配體CD

6、80(B7-1)和CD86(B7-2)的結合。CD28/B7分子之間的相互作用,可提高T細胞對抗原刺激的敏感性,穩(wěn)定細胞間接觸,從而提供T細胞激活所必不可少的協(xié)同刺激信號。若缺乏CD80和CD86的表達,T細胞被誘導呈不應答狀態(tài),此時腫瘤細胞是沒有免疫原性的。作為DCs的標記,臨床組織切片多以S-100確認DCs。另外,新近證明CD83是成熟的有活性的DCs的最具特異性標記物。
　　材料和方法：所有標本均來自汕頭大學醫(yī)學院第二附屬

7、醫(yī)院2001年至2002年外科手術切除標本,共30例,經病理組織學檢查證實為食管癌,病理類型均為鱗狀細胞癌,所有標本含有癌旁組織,取距癌組織邊緣8cm以外的組織標本作為正常對照組織(經HE染色證實無癌細胞浸潤)。標本經福爾馬林固定、脫水、常規(guī)石蠟包埋,制備成5mm厚連續(xù)切片備用。鼠抗人CD80、CD86、CD83抗原IgG單克隆抗體均為美國Pharmingen公司產品;S-100多克隆抗體、SP與SAP免疫組織化學檢測試劑盒購自北京中山

8、試劑公司;New Fuchsin顯色劑購自美國Labvision公司。
　　結果：1.與正常食管粘膜組織相比,食管癌組織表達更少的CD80(24.37±4.87 VS46.25±14.04, P<0.01)、CD86(20.37±4.89 VS26.87±5.89, P<0.05)及S-100(56.32±6.25 VS72.45±12.34, P<0.01)。2. CD83分子的表達在癌旁組織中明顯增多(7.82±6.69 VS