循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞在心血管疾病中檢測(cè)方法的建立與驗(yàn)證.pdf

1、目的：循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞（circulating endothelial cells，CECs）產(chǎn)生于血管損傷過程。血管損傷與多種疾病的發(fā)生息息相關(guān)，這其中包括了急性心肌梗塞（acute myocardial infarction，AMI）。因此CECs可能作為這些疾病的發(fā)生及預(yù)后標(biāo)記物。本實(shí)驗(yàn)研究CECs在AMI病患和小鼠疾病模型的外周血中的水平，并監(jiān)測(cè)其在預(yù)后中的表達(dá)狀況。
　　方法：基于標(biāo)準(zhǔn)流式細(xì)胞術(shù)的穩(wěn)定，本實(shí)驗(yàn)組設(shè)計(jì)了多參數(shù)共

2、同標(biāo)記CECs體系，檢測(cè)人體外周血中CECs的表達(dá)抗體為Hoechst
　　33342+/ CD45-/ CD31+/ CD146+/ CD133-，檢測(cè)小鼠外周血中CECs的表達(dá)抗體為Hoechst33342+/ CD45-/ CD31+/ KDR+/ CD117-。首先，為了研究本設(shè)計(jì)體系的穩(wěn)定性，本實(shí)驗(yàn)組構(gòu)建了VEGF處理小鼠，收集其外周血，同時(shí)收集了AMI病患的外周血做組內(nèi)穩(wěn)定性檢測(cè)。其次，為了研究此檢測(cè)系統(tǒng)的有效性，本實(shí)

3、驗(yàn)組用Real-time PCR和流式細(xì)胞術(shù)共同檢測(cè)樣品中CEC含量。最后，用流式檢測(cè)臨床的大量樣本中CECs占外周血單核細(xì)胞群體的比例，這批臨床樣本包括61名AMI患者，45名健康成年人，以及19名治療一個(gè)月后的AMI病患。
　　結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)做設(shè)計(jì)的基于流式細(xì)胞術(shù)的多參數(shù)共同標(biāo)記CECs體系是準(zhǔn)確可行。在AMI病患的外周血中CECs的水平確實(shí)顯著高于正常健康機(jī)體外周血中CECs的含量。經(jīng)過一個(gè)月的治療，AMI病患外周血系統(tǒng)中CE