缺氧誘導(dǎo)因子-1α介導(dǎo)的熱休克蛋白70在熱耐受對(duì)抗高溫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、目的:
　　觀察在非致死性高溫誘導(dǎo)的熱耐受過(guò)程中HIF-1α對(duì)HSP70的表達(dá)的影響及其在熱耐受保護(hù)中的作用。闡明熱耐受過(guò)程中HSP70的表達(dá)是否具有HIF-1α依賴性，HIF-1α介導(dǎo)的HSP70是否通過(guò)其抗細(xì)胞凋亡作用參與心肌細(xì)胞熱耐受保護(hù)。
　　方法:
　　(1)將H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為12組，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次:常溫對(duì)照組（Control組）、熱耐受組（T組）、熱耐受/高溫組（T/H組）、高溫組（H組）、DMS

2、O+常溫對(duì)照組(DMSO組)、YC-1干預(yù)+熱耐受組（YC-1+T組）、YC-1干預(yù)+熱耐受/高溫（YC-1+T/H組）、YC-1干預(yù)+高溫組（YC-1+H組）、Lipo+常溫對(duì)照組（Lipo組）、RNAi干擾+熱耐受組（RNAi+T組）、RNAi干擾+熱耐受/高溫（RNAi+T/H組）、RNAi干擾+高溫組（RNAi+H組）。(2)培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞，建立熱耐受(40℃，3 h)及熱應(yīng)激(43℃，2 h)模型。(3)使用HIF-1α

3、的特異性抑制劑YC-1（終濃度100μM/L），在轉(zhuǎn)錄后水平抑制HIF-1α的表達(dá)后進(jìn)行熱耐受或高溫處理。(4)使用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染HSP70-siRNA于H9c2心肌細(xì)胞后進(jìn)行熱耐受或高溫處理。(5)采用AnnexinV-FITC雙染流式細(xì)胞法檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率;Western blot檢測(cè)細(xì)胞HIF-1α、HSP70及caspase-3蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　(1)熱耐受/高溫組的細(xì)胞凋亡

4、率顯著低于高溫組(p＜0.01)。抑制HIF-1α表達(dá)后的熱耐受/高溫組和高溫組的凋亡率均顯著高于未經(jīng)YC-1處理的相應(yīng)組(p＜0.01)，并且抑制HIF-1α表達(dá)后，熱耐受/高溫組與高溫組的凋亡率沒(méi)有顯著差別。(2)與常溫對(duì)照組相比，熱耐受能顯著提高HIF-1α和HSP70的表達(dá)水平(p＜0.05);熱耐受/高溫組的HIF-1α和HSP70表達(dá)水平均明顯高于高溫組(p＜0.01)。與對(duì)照組相比，YC-1能夠明顯抑制熱耐受組、熱耐受/高

5、溫組及高溫組的HIF-1α(p＜0.01)。抑制HIF-1α表達(dá)后的熱耐受組、熱耐受/高溫組及高溫組，其HSP70的表達(dá)也顯著低于對(duì)照組(p＜0.01)。使用HSP70-siRNA抑制HSP70的表達(dá)后，熱耐受/高溫組HIF-1α的表達(dá)量仍顯著高于高溫組(p＜0.01)。(3)熱耐受/高溫組的caspase-3表達(dá)水平顯著低于高溫組(p＜0.01)。抑制HIF-1α表達(dá)后，熱耐受/高溫組及高溫組caspase-3的表達(dá)水平均明顯增加(p