應(yīng)用PCR等技術(shù)檢測皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中HPV的研究.pdf

1、背景：由于環(huán)境和生活方式的改變，近年來皮膚癌的發(fā)病率顯著增高，尤其是皮膚鱗狀細(xì)胞癌(SCC)，呈現(xiàn)年輕化趨勢，嚴(yán)重威脅人類健康。但該腫瘤的具體發(fā)生機(jī)制仍不清楚，相關(guān)研究認(rèn)為紫外線照射、免疫機(jī)能抑制、病毒感染等可能與SCC的發(fā)生有密切關(guān)系。眾多致癌因素中，病毒對于人類惡性腫瘤的作用正受到越來越多的關(guān)注，據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，約15-20％人類腫瘤的發(fā)生與病毒有關(guān)。研究已經(jīng)表明人乳頭瘤病毒(HPV)感染對子宮頸癌的發(fā)病具有確切作用，在表皮惡性

2、皮損中HPV的檢出也顯著增高，因此這些皮膚黏膜上皮腫瘤與HPV的關(guān)系也引起國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。 HPV屬乳多空科病毒，是小的無包膜嗜上皮性雙鏈環(huán)狀DNA病毒，具有強(qiáng)烈的嗜上皮性，通過微小損傷侵入機(jī)體表皮和黏膜上皮，潛伏于上皮基底細(xì)胞，時(shí)機(jī)成熟進(jìn)入角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行增殖，引起被感染細(xì)胞的顯著增生甚至惡性轉(zhuǎn)化。目前基因序列已確定120余種類型。根據(jù)是否能引起皮膚和黏膜的惡性病變，分為低危型和高危型。低危型有HPV6、11、13、32

3、、45等，它與表皮內(nèi)瘤樣增生性疾病相關(guān)；高危型包括HPV16、18、31、33、35等，與上皮性惡性腫瘤密切相關(guān)。這些類型HPV具有相同的基因組基本結(jié)構(gòu)，主要包括早期區(qū)、晚期區(qū)、上游調(diào)控區(qū)。早期區(qū)編碼E1、E2、E6、E7等早期蛋白，其中E6、E7蛋白與腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切；晚期區(qū)編碼病毒的殼蛋白L1、L2；上游調(diào)控區(qū)為對病毒在細(xì)胞中的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄等起調(diào)控作用的非編碼區(qū)。 目前分子機(jī)制水平上已經(jīng)為HPV致癌提供了有力證據(jù)。研究表明高

4、危型HPV16、18能使培養(yǎng)的人的原代上皮細(xì)胞永生化，而癌細(xì)胞的永生化是使腫瘤發(fā)生惡性增殖的關(guān)鍵。研究已經(jīng)顯示高危型HPV的E6、E7蛋白產(chǎn)物能夠使病毒具有上述作用，二者協(xié)同或單獨(dú)作用都能夠使人的原代上皮細(xì)胞發(fā)生永生化。 對于HPV與皮膚SCC關(guān)系的研究始于80年代，特別是HPV對于子宮頸癌發(fā)生作用的確定，更推進(jìn)了該類研究的進(jìn)展。但到目前為止，HPV與皮膚SCC之間的關(guān)系仍沒有確切定論。獲得普遍認(rèn)同的是與某些生殖器部位原位鱗癌(

5、BD)之間的密切關(guān)系，但對其他部位原位或侵襲性SCC的作用仍不確定。目前國內(nèi)外該類研究多采用單一方法進(jìn)行檢測，但鑒于PCR特異性和ISH敏感性的局限，檢測結(jié)果不一，相差較大。本研究采用PCR、ISH結(jié)合IHC三種方法進(jìn)行檢測。 目的：檢測免疫正常個(gè)體SCC、BD患者皮損中HPV陽性率，探討皮膚、外生殖器SCC與HPV感染的關(guān)系。 材料和方法：(1)選山東省皮膚病性病防治研究所1995～2004年間經(jīng)臨床和組織病理學(xué)確診的

6、皮膚鱗癌病人86例，標(biāo)本為石蠟包埋的皮損組織，其中SCC66例，BD20例。分布于頭面部、軀干、四肢、指端共62例，外陰24例。對照組標(biāo)本33例均取自我院美容整形外科就醫(yī)者外觀正常皮膚，其中外陰部位5例，其余部位28例。(2)分別用PCR、ISH、IHC三種方法對上述全部或部分標(biāo)本和對照標(biāo)本進(jìn)行檢測。PCR、ISH兩種方法檢測HPV類型均為：HPV6、11、16、18、31、33，IHC方法除檢測上述類型外還包括5種HPV類型：HPV4

7、2、51、52、56和HPV58。(3)所得數(shù)據(jù)用SPSS軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，三種方法檢測結(jié)果均采用確切概率法計(jì)算P值。 結(jié)果：(1)PCR檢測結(jié)果：62例患者皮損標(biāo)本共檢出3例呈現(xiàn)HPVDNA陽性，均為SCC病例，其中2例位于肢端，病例組HPV總陽性率為4.84％(3/62)。其中31例皮膚SCC，3例HPV陽性，19例外陰SCC、1例外陰BD、11例生殖器外BD(EBD)均未檢出HPVDNA。檢出的類型分別為HPV6、16、

8、33，其中1例患者皮損標(biāo)本中同時(shí)檢出HPV16和HPV33混合感染。對照組20例標(biāo)本均為陰性。病例組與對照組比較差別無顯著性(P＞0.05)。(2)ISH檢測結(jié)果：86例患者皮損標(biāo)本共檢出3例呈現(xiàn)HPVDNA陽性，病例組HPVDNA陽性率為3.49％(3/86)。其中皮膚SCC44例，2例HPV陽性，外陰BD2例，1例HPV陽性，22例外陰SCC、18例皮膚EBD中均未檢出HPVDNA。檢出類型分別為HPV6、HPV16、HPV33，其