茶黃素的分離制備及對大鼠的降脂減肥研究.pdf

1、大量研究表明肥胖癥可以引起高血壓、糖尿病、冠心病等多種慢性疾病,已成為全球性嚴重的公共衛(wèi)生問題。紅茶是世界上消費最多的茶類,許多研究表明紅茶具有降脂減肥的效果,茶黃素可能是其降脂減肥的重要功效成分。本論文通過對茶黃素單體的分離制備、熱穩(wěn)定性和堿穩(wěn)定性研究,以及茶黃素對大鼠降脂減肥效果的研究,取得了下列研究成果:
　　 1.大孔樹脂層析法聯(lián)合半制備液相色譜分離制備四種茶黃素單體:茶黃素(TF1)、茶黃素-3-沒食子酸酯(TF2A)

2、、茶黃素-3’-沒食子酸酯(TF2B)、茶黃素-3,3'-雙沒食子酸酯(TF3)。大孔樹脂分離茶黃素優(yōu)化工藝參數(shù)如下:AB-8大孔樹脂對TF40(茶黃素約占50％)進行吸附后,用20％、30％、40％、50％和60％的乙醇溶液以2 BV/h速度梯度洗脫,得到TF80(茶黃素約占80％),茶黃素回收率為60％。半制備高效液相色譜分離茶黃素單體最佳條件為:流動相為水:乙腈:冰醋酸(73.5:26:0.5,v/v/v)；流速為5mL/min；

3、茶黃素最大上樣量為30 mg；每次分離耗時45 min,TF2A、TF2B和TF3的純度大于90％,茶黃素回收率達50％以上。
　　 2.茶黃素四種單體在4℃-135℃下的熱穩(wěn)定性研究表明:溫度越高,茶黃素降解速度越大。茶黃素單體降解反應的活化能Ea越小則越不穩(wěn)定,四種茶黃素單體在4℃-100℃熱穩(wěn)定性,由高到低依次為TF3,TF2B,TF2A和TF1。同理所得茶黃素四種單體在高溫高壓(110℃-135℃)條件下熱穩(wěn)定性,由高到

4、低依次為TF2B,TF3,TF2A和TF1。TF2B和TF3穩(wěn)定性比較接近,TF2A和TF1穩(wěn)定性比較接近.而且高溫高壓下茶黃素降解速度更快。
　　 3.對茶黃素在堿性條件下反應產(chǎn)物的研究表明:茶黃素復合物在堿性條件下反應13h時,在HPLC-MS圖譜中TF1和TF2A之間出現(xiàn)新峰A,其分子量為729,與文獻報道中的茶黃素-3-(3-O-甲基)-沒食子酸酯(TF3MeG)分子量相符。茶黃素單體TF1在堿性條件下反應1h后在TF1

5、的吸收峰之前出現(xiàn)新峰B,經(jīng)LC-MS鑒定,未知物B的分子量為550,可能是和茶萘醌(TNQ)結(jié)構(gòu)類似的一種物質(zhì)。
　　 4.采用不同含量的茶黃素樣品:BTE(紅茶提取物)、TF14(茶黃素約占14％)、TF40、TF80、TF1,進行大鼠肥胖防治實驗.從血糖水平、胰島素水平、血脂水平、脂質(zhì)代謝酶體系、抗氧化酶體系等全方面探討茶黃素降脂減肥的機理。
　　 4.1茶黃素可以降低大鼠體重和脂肪積累。雄性SD大鼠經(jīng)茶黃素灌胃15

6、天后,茶黃素處理組的大鼠體重增長開始被顯著抑制。灌胃31天后,與高脂組相比,TF1組和TF14組大鼠減重最多,大于9.00％:BTE組大鼠減少脂肪累積最多,脂體比比高脂組小30.93％；各處理組大鼠同高脂組大鼠相比顯著減少了攝食量,但與正常組大鼠相比無統(tǒng)計學上差異。
　　 4.2茶黃素可以調(diào)節(jié)大鼠血清和肝臟中的血脂水平。各處理組與高脂組相比,大鼠血清TC降低了1.77％-26.47％.TF80組血清TC降低最多,其次TT40組,

7、再次TF1組。TF14組,最次BTE組。大鼠肝臟TC情況與血清的類似,TF40組、TFS0組的肝臟TC含量顯著小于高脂組22.47％。各處理組大鼠血清TG與高脂組相比顯著降低了24.61％-49.23％(p<0.01)；各處理組大鼠肝臟中TG含量與高脂組相比有降低趨勢。各處理組大鼠肝臟內(nèi)的HDL水平比高脂組的顯著提高了47.37％-126.32％(p<0.05),但是各處理組對血清HDL,水平無顯著影響。
　　 4.3茶黃素可以

8、改善大鼠肝臟中脂質(zhì)代謝。經(jīng)茶黃素干預后,各處理組大鼠體內(nèi)瘦素含量較高脂組下降了13.00％-29.15％,TF40效果優(yōu)于其他處理。LPS活性比高脂組降低了13.52％-42.04％,TF1組抑制LPS活性最強；茶色素的含量越高,其抑制脂肪酶的活性越強。除TF14組之外,其余處理組大鼠肝臟中FAS含量顯著低于高脂組24.07％-29.63％,TF40組抑制效果最好。各處理組對肝臟中FFA水平的調(diào)節(jié)沒有顯著影響。
　　 4.4茶黃

9、素可以改善大鼠體內(nèi)血糖和胰島素水平。各實驗組大鼠的空腹血糖無統(tǒng)計學差異。各處理組大鼠空腹胰島素水平較高脂組的降低了16.84％-55.79％,各處理組大鼠的胰島素敏感系數(shù)(ISI)顯著大于高脂組10.84％-54.84％,各處理組大鼠的ISI值大小順序為:BTE組>TFl4組、TF1組>TF80組、TT40組。
　　 4.5茶黃素可以改善大鼠血清和肝臟中的抗氧化酶系。各處理組大鼠血清和肝臟中的SOD酶活都大于高脂組的,TF1組大

10、鼠血清和肝臟SOD酶活最高,優(yōu)于其他處理組。各處理對血清CAT酶活沒有顯著性影響；除TF80組外,其余茶黃素處理組大鼠肝臟中CAT酶活高于高脂組3.17％-25.60％,且TF1組>TF14組>BTE組>TF40組。各處理對血清GSH-PX酶活沒有顯著性影響,但是肝臟中的GSH-PX酶活高于高脂組13.23％-45.00％；且BTE組>TF14組、TF40組>TF1組、TF80組。各處理組大鼠血清MDA水平比高脂組的降低了11.53％-

11、30.09％:隨著茶黃素含量的增加,大鼠血清MDA含量越低,即TF1組　　 總之,本實驗中含茶黃素的五種材料都具有預防大鼠肥胖的效果,其機理是各種含茶黃素的材料可以干預糖代謝,降低胰島素水平,提高胰島素的敏感指數(shù),改善血清中的TC、TG、HDL水平；可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝相關(guān)的酶系,減少FFA的生成,干預脂質(zhì)代謝,減少體內(nèi)脂質(zhì)積累；還可以通過改善機