PTEN與VEGF在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及相互作用.pdf

1、第一部分PTEN與VEGF在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義 一PTEN在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中表達(dá)及其意義 目的：檢測(cè)第10號(hào)染色體上缺失與張力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)蛋白及mRNA在肝細(xì)胞癌和癌旁組織中的表達(dá)，并分析和探討PTEN表達(dá)情況與HCC發(fā)生、發(fā)展、侵襲性及轉(zhuǎn)移的關(guān)系和臨床意義。 方法：利用免疫組織化學(xué)鏈霉素親合素—生物素—過(guò)氧化物酶復(fù)合物(SP)法、半定量逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)6

2、0例肝細(xì)胞癌及癌旁組織中PTENmRNA及蛋白表達(dá)，并進(jìn)一步比較分析PTENmRNA及蛋白表達(dá)在二者中的差異。 結(jié)論：PTEN蛋白及mRNA在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性強(qiáng)度明顯低于癌旁組織中，并與肝細(xì)胞癌組織分化程度和侵襲性呈負(fù)相關(guān)。因此我們推斷PTEN基因表達(dá)率的高低可能與肝細(xì)胞癌的發(fā)生及預(yù)后均有關(guān)，PTEN表達(dá)水平一定程度上能反映肝細(xì)胞癌組織分化和侵襲性強(qiáng)弱，PTEN表達(dá)缺失提示肝細(xì)胞癌患者預(yù)后較差。 二VEGF在原發(fā)

3、性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義 目的：檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)蛋白及mRNA在肝細(xì)胞癌和癌旁組織中的表達(dá)，并分析和探討VEGF表達(dá)情況與HCC發(fā)生、發(fā)展、侵襲性及轉(zhuǎn)移的關(guān)系和臨床意義。 方法：利用免疫組織化學(xué)鏈霉素親合素—生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(SP)法、半定量逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)60例肝細(xì)胞癌及癌旁組織中VEGFmRNA及蛋白表達(dá)，并進(jìn)一步比較分析VEGFmRNA及蛋白表達(dá)在二者中差異。

4、 結(jié)論：1、VEGFmRNA及蛋白在肝細(xì)胞癌組織中陽(yáng)性表達(dá)不僅明顯高于癌旁肝組織，而且隨癌組織侵襲性及患者臨床惡性進(jìn)展程度增加而增強(qiáng)，這可能是由于HCC進(jìn)展過(guò)程中，需要大量新生血管為其提供氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因而，腫瘤侵襲性強(qiáng)、臨床惡性程度高者，VEGF轉(zhuǎn)錄、翻譯表達(dá)均增加，VEGF表達(dá)水平一定程度上能反映肝細(xì)胞癌組織分化和侵襲性強(qiáng)弱，肝細(xì)胞癌組織分化程度、侵襲性與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)。2、本研究觀察到，VEGF主要在HCC細(xì)胞表達(dá)，而血管

5、內(nèi)皮細(xì)胞僅個(gè)別弱表達(dá)，從而推測(cè)，VEGF可以通過(guò)自分泌機(jī)制作用于自身腫瘤細(xì)胞，也可能以旁分泌途徑作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，具體機(jī)制有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。 三PTEN、VEGF和MVD在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中相關(guān)性及其與臨床病理特征的關(guān)系 目的：肝細(xì)胞癌是富含血管的實(shí)體瘤，血管生成在其發(fā)生、發(fā)展和侵襲、轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。本課題的前期實(shí)驗(yàn)提示觀察PTEN與VEGF表達(dá)與肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展和侵襲、轉(zhuǎn)移起一定的作用，其水平一定程度上能

6、反映肝細(xì)胞癌組織分化和侵襲性強(qiáng)弱，本實(shí)驗(yàn)觀察PTEN與VEGF在肝細(xì)胞癌中表達(dá)的相關(guān)性和肝細(xì)胞癌血管形成的關(guān)系。 方法：采用免疫組織化學(xué)鏈霉素親合素—生物素—過(guò)氧化物酶復(fù)合物(SP)法、半定量逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)60例HCC及癌旁組織中PTEN與VEGF蛋白及mRNA表達(dá)和微血管密度。 結(jié)論：1、PTEN和VEGF蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，從而表明VEGF異常激活可能與PTEN基因表達(dá)缺失有密切關(guān)系。在肝細(xì)

7、胞癌中PTEN可能具有負(fù)向調(diào)節(jié)VEGFmRNA及其蛋白表達(dá)作用，這在臨床上有一定意義，即可根據(jù)PTEN蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況估計(jì)HCC患者病程是否進(jìn)展及有無(wú)肝內(nèi)轉(zhuǎn)移，初步估計(jì)預(yù)后。 2、肝細(xì)胞癌組織中VEGF蛋白表達(dá)與MVD呈正相關(guān)而與PTEN蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，MVD在腫瘤邊緣部分分布最多，而且肝癌組織高侵襲區(qū)域通常位于其前沿，即周邊區(qū)域，該區(qū)域癌細(xì)胞分泌VEGF等細(xì)胞因子較多，新生血管數(shù)目較豐富，更易腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶進(jìn)入血管，發(fā)生

8、侵襲和轉(zhuǎn)移，提示VEGF對(duì)新生血管形成起重要作用，而高表達(dá)MVD肝癌組織較低MVD值者更易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移、預(yù)后更差。 第二部分PTEN質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞對(duì)VEGF的作用及意義 目的：研究PTEN質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞后，腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性的變化及腫瘤細(xì)胞內(nèi)VEGF的表達(dá). 方法：將攜有PTEN基因的真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，應(yīng)用RT-PCR、ELISA法檢測(cè)轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞內(nèi)PTEN、VEGF在mRNA水平

9、的表達(dá)；應(yīng)用免疫組化技術(shù)、WestenBlot等技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后肝癌細(xì)胞中PTEN、VEGF的蛋白表達(dá)；并檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞活力和繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，反應(yīng)PTEN過(guò)表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。 結(jié)論：PTEN在肝癌細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)能夠有效地抑制肝癌細(xì)胞的增殖，并下調(diào)VEGF的表達(dá)，從而減少由VEGF介導(dǎo)的腫瘤血管形成。 第三部分VEGF反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞后PTEN的變化及意義 目的：研究VEGF反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染

10、肝癌細(xì)胞后，對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響和PTEN表達(dá)的變化。 方法：將人工合成VEGF反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞hepG2后，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率以及肝癌細(xì)胞的凋亡，觀察肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖的變化；同時(shí)應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)肝癌細(xì)胞中VEGF和PTEN的表達(dá)，應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染前后HepG2細(xì)胞PTEN表達(dá)及其形態(tài)學(xué)的變化。 論：VEGF反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染HepG2肝癌細(xì)胞后，能夠有效地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖活性，使