應激狀態(tài)下大鼠腸屏障功能損傷過程中細胞因子的改變及意義.pdf

1、目的：探究應激狀態(tài)下大鼠腸粘膜屏障功能的改變，以及在此過程中某些細胞因子的作用和它們之間的相關性，以期初步了解腸屏障損傷的細胞生物學機制，尋找能夠阻斷腸屏障功能損傷過程的保護因素，為臨床嚴重應激和危重病患者的治療和預后探索新的途徑。 方法：健康Wistar大白鼠60只，雌雄不限，隨機分為實驗組、對照組和正常組，每組20只。實驗組通過以顯微手術用無損傷動脈夾夾閉腸系膜上動脈起始部，1小時后松夾恢復腸系膜上動脈血流制成腸缺血后再灌流

2、模型，對照組只進行同樣腹部手術操作但不夾閉腸系膜上動脈。正常組不手術。6小時后處死動物，3組同樣進行腸系膜上動脈多聚甲醛灌注，取距回盲部15厘米處腸管1厘米，常規(guī)固定、石蠟包埋，組織切片，通過普通HE染色觀察腸粘膜組織細胞學形態(tài)；用免疫組織化學方法染色顯示腸粘膜組織或細胞中腫瘤壞死因子、血管活性腸肽、基質金屬蛋白酶-13及層粘連蛋白的表達情況；并用VIDAS圖象分析系統(tǒng)進行半定量分析。 結果：普通HE染色結果顯示：光鏡下，實驗組

3、與對照組相比，可見腸壁變薄，上皮細胞水腫明顯，部分壞死脫落，小腸絨毛短細，絨毛間距變寬。中性粒細胞及淋巴細胞浸潤，個別腸粘膜固有層內腺體出現(xiàn)灶性區(qū)域壞死。免疫組織化學染色顯示：實驗組腸粘膜上皮細胞胞漿及基質腫瘤壞死因子表達較對照組增高，VIDAS圖象分析測得光密度值分別為：實驗組0.45±0.0183，對照組0.27±0.0196，正常組0.26±0.0187；粘膜組織中基質金屬蛋白酶-13表達較對照組增高，VIDAS圖象分析測得光密度

4、值分別為：實驗組0.29±0.0253，對照組0.16±0.0249，正常組0.15±0.0251；基底膜層粘連蛋白表達較對照組降低，VIDAS圖象分析測得光密度值分別為：實驗組0.29±0.0672，對照組0.47±0.0685，正常組0.50±0.0679，實驗組和對照組之間統(tǒng)計學比較差異有顯著性(P＜0.01)，對照組與正常組相比無明顯差異(P＞0.05)。腸粘膜上皮細胞核內血管活性腸肽表達較對照組增高，VIDAS圖象分析測得光密

5、度值分別為：實驗組0.13±0.0303，對照組0.11±0.0208，正常組0.10±0.0378，實驗組和對照組統(tǒng)計學比較差異有顯著性(P＜0.05)。對照組與正常組相比無明顯差異(P＞0.05)。 結論：應激時由于缺血再灌注，腸粘膜上皮細胞胞漿和基質腫瘤壞死因子、上皮細胞核內血管活性腸肽表達失衡導致粘膜組織中基質金屬蛋白酶-13表達增高，進而使其降解底物層粘連蛋白降低，腸粘膜萎縮及通透性增大，導致腸屏障功能損傷、腸源性細菌