癌胚抗原相關(guān)結(jié)直腸癌的臨床及蛋白質(zhì)組學(xué)初步研究.pdf

1、CRC是世界上最常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，我國(guó)CRC的死亡率在常見(jiàn)腫瘤中排在第四位，發(fā)病率在逐漸上升。目前臨床上早期診斷率不高，就診的患者大多數(shù)已經(jīng)屬于進(jìn)展期。CEA是臨床上應(yīng)用最廣泛的血清腫瘤學(xué)標(biāo)志物，但其敏感性和特異性不高。與CEA+CRC相比，CEA-CRC更缺乏血清學(xué)診斷和監(jiān)測(cè)指標(biāo)。因此，很迫切需要尋找一些更有效的CRC分子標(biāo)志物。穩(wěn)定同位素標(biāo)記聯(lián)合液相串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(iTRAQ-LC-MS/MS)的建立和發(fā)展，為尋找有效腫瘤分子標(biāo)

2、志物提供了可靠的技術(shù)手段。本研究以CRC為研究對(duì)象，分以下幾個(gè)部分進(jìn)行，試圖篩選出有價(jià)值的CRC候選標(biāo)志物。
　　第一部分血清CEA陰性和陽(yáng)性結(jié)直腸癌的臨床和流行病特征比較——附1969例分析
　　本部分的研究目的是通過(guò)回顧性調(diào)查與CEA相關(guān)1969例CRC患者的臨床和流行病學(xué)特征，了解CEA相關(guān)的這兩類(lèi)CRC有何不同以及CEA的血清陽(yáng)性率情況，為后續(xù)基礎(chǔ)研究做鋪墊。
　　結(jié)果顯示，CEA的血清陽(yáng)性率為38.04％，C

3、EA陰性結(jié)直腸癌平均發(fā)病年齡比CEA陽(yáng)性結(jié)直腸癌年輕2歲多，中位發(fā)病年齡較后者提前3歲，發(fā)病人群以60歲以下的青壯年為主，其中A型血患者比例較高，而B(niǎo)型血患者比例較低，并發(fā)2型糖尿病和結(jié)腸腸梗阻比例較低。
　　本研究說(shuō)明，CEA血清陽(yáng)性率不高，缺乏敏感性，CEA陰性結(jié)直腸癌和CEA陽(yáng)性結(jié)直腸癌在臨床和流行病學(xué)上確實(shí)有一定的差異，為后續(xù)深入研究奠定了基礎(chǔ)。
　　第二部分 CEA陰性和陽(yáng)性結(jié)直腸癌的組織蛋白質(zhì)組學(xué)比較與驗(yàn)證

4、>　　本部分的研究目的是比較血清CEACRC和CEA+CRC與正常粘膜組織(normal mucosa，NM)之間差異表達(dá)蛋白，驗(yàn)證部分有差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，試圖尋找潛在的候選標(biāo)志物。
　　結(jié)果顯示，在篩出的57個(gè)差異蛋白質(zhì)中，大多數(shù)細(xì)胞功能定位在胞內(nèi)，生物學(xué)過(guò)程主要體現(xiàn)為調(diào)控和代謝，分子功能主要參與結(jié)合。許多差異蛋白之間有聯(lián)系，尤其是差異蛋白TTN、PRDX1、TAGLN、TP11等，處于蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)的中心樞紐節(jié)點(diǎn)上。采用We

5、stern Blot(WB)和免疫組織化學(xué)染色驗(yàn)證差異蛋白Annexin A5和Trangelin表達(dá)，它們趨勢(shì)與質(zhì)譜鑒定信息一致。采用熒光定量PCR驗(yàn)證Lumican蛋白對(duì)應(yīng)基因mRNA表達(dá)水平，結(jié)果與質(zhì)譜信息不一致。
　　本研究說(shuō)明，iTRAQ定量標(biāo)記是尋找CRC有效分子標(biāo)志物的重要方法，但需要驗(yàn)證確認(rèn)。本實(shí)驗(yàn)篩選出一組與CEA相關(guān)組織差異蛋白，其中有些可能是CRC潛在的分子標(biāo)志物。
　　第三部分 CEA陰性和陽(yáng)性結(jié)直腸

6、癌的分泌蛋白質(zhì)組學(xué)比較與驗(yàn)證
　　本部分的研究目的是比較血清CEACRC、CEA+CRC與NM微小組織塊培養(yǎng)上清之間差異分泌表達(dá)蛋白，驗(yàn)證部分有差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，試圖尋找可能在血清中出現(xiàn)的的潛在候選標(biāo)志物。
　　結(jié)果顯示，在篩出的61個(gè)差異蛋白質(zhì)中，總共有50.82％(31/61)是分泌蛋白，其中有一些是未見(jiàn)報(bào)道與腫瘤相關(guān)的分泌差異蛋白，Western Blot驗(yàn)證差異蛋白Annexin A5和Trangelin，結(jié)果顯示它

7、們表達(dá)趨勢(shì)與質(zhì)譜鑒定信息基本相似，但分泌表達(dá)模式與組織表達(dá)模式存在分離現(xiàn)象。
　　本研究說(shuō)明，分泌蛋白組學(xué)是組織蛋白組學(xué)的有益補(bǔ)充;本實(shí)驗(yàn)篩選出一組與CEA相關(guān)的分泌差異蛋白，可能是CRC潛在的血清分子標(biāo)志物。
　　第四部分 AnnexinA5和Lumican在結(jié)直腸癌的表達(dá)和意義
　　本部分的研究目的是擴(kuò)大樣本研究Annexin A5和Lumican在結(jié)直腸癌的表達(dá)和意義，為下一步進(jìn)行功能研究進(jìn)行初步篩選。
　

8、　結(jié)果顯示，Annexin A5在CRC陽(yáng)性率為40％(20/50)，明顯高于正常組織，其表達(dá)與CRC分期、轉(zhuǎn)移有關(guān)。Lumican在結(jié)直腸癌呈高表達(dá)，與病理參數(shù)無(wú)關(guān)。
　　本研究說(shuō)明，Annexin A5和Lumican是結(jié)直腸癌的重要候選分子標(biāo)志物，具體的作用機(jī)制還有待深入研究。
　　結(jié)論
　　1.CEA血清陽(yáng)性率不高，缺乏敏感性，CEA陰性結(jié)直腸癌和CEA陽(yáng)性結(jié)直腸癌在臨床和流行病學(xué)上確實(shí)有一定的差異。
　

9、　2.iTRAQ定量標(biāo)記是尋找CRC有效分子標(biāo)志物的重要方法，但需要驗(yàn)證確認(rèn)。組織蛋白組學(xué)篩選出57個(gè)與CEA相關(guān)差異蛋白，分泌蛋白組學(xué)選出61個(gè)與CEA相關(guān)差異蛋白，兩組差異蛋白有較多重復(fù)，但差異蛋白的組織表達(dá)模式與分泌表達(dá)模式可以不一致。本組篩選出的差異蛋白，有些可能CRC潛在分子標(biāo)志物。
　　3.改良Alamar blue法是檢測(cè)組織塊活力靈敏有效的新型檢測(cè)方法之一。
　　4.AnnexinA5和Lumican表達(dá)與結(jié)