構(gòu)建反義雙價(jià)TuMV—Nib和LFY基因植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)春大白菜研究.pdf

1、大白菜雖是原產(chǎn)我國(guó)的重要蔬菜作物，但春大白菜育種國(guó)內(nèi)起步較晚，生產(chǎn)上大多使用從日本、韓國(guó)進(jìn)口的種子。雖有一定的耐抽薹，但不抗病毒病。在大白菜生產(chǎn)中，先期抽薹和后期病毒病重已經(jīng)成為亟待解決的問(wèn)題。采用常規(guī)育種方法培育耐抽薹、抗病毒大白菜品種年限長(zhǎng)、效率低。因此，結(jié)合常規(guī)育種方法，采用基因工程技術(shù)克隆相關(guān)基因，控制植物的開(kāi)花和病毒的復(fù)制，創(chuàng)新大白菜抗病毒、耐抽薹種質(zhì)材料，進(jìn)而育成具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的商品性好、抗病毒病、冬性較強(qiáng)不易抽薹的春大白

2、菜育種材料和品種，打破國(guó)內(nèi)春大白菜種子依靠進(jìn)口的局面，均具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。 本研究以中國(guó)春大白菜為材料，在采用RT-PCR技術(shù)克隆的TuMV-NIb、LFY基因的基礎(chǔ)上，構(gòu)建成反義雙價(jià)基因的植物表達(dá)載體，利用TuMV-NIb基因的目的是抵抗蕪菁花葉病毒，LFY基因的目的是延遲植物的開(kāi)花時(shí)間。通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化研究，建立了大白菜遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，為利用TuM V-NIb與LFY雙價(jià)基因，抵抗大白菜蕪菁花葉病毒和抑制抽薹奠定基礎(chǔ)，培

3、育抗病毒和耐抽薹春大白菜新種質(zhì)。并獲得了轉(zhuǎn)TuMV-NIb、LFY基因的陽(yáng)性植株。主要研究結(jié)果如下： 1.近幾年來(lái)，TuMV不同株系的核苷酸序列得到測(cè)定。病毒復(fù)制相關(guān)蛋白基因轉(zhuǎn)入煙草發(fā)現(xiàn)，對(duì)TuMV有極強(qiáng)的抗性。LFY基因處于成花相關(guān)基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵位置，屬于開(kāi)花決定基因。通過(guò)基因工程手段控制花發(fā)育或開(kāi)花時(shí)間基因的表達(dá)，可改變受體植物的花期，直接控制作物生育期。利用克隆的TuMV-NIb、LFY基因，通過(guò)酶切、連接、轉(zhuǎn)化，重組

4、質(zhì)粒的PCR擴(kuò)增、酶切鑒定，構(gòu)建成雙價(jià)反義基因的植物表達(dá)載體；采用凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404，獲得了工程菌株。 2.研究了基因型、激素配比等影響大白菜再生的限制因素，確定了以“青3福山”大白菜帶柄子葉為外植體的分化培養(yǎng)基為：MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L+TDZ0.1mg/L+AgNO34mg/L；在25℃，16/8hr(光/暗)下培養(yǎng)，不定芽的分化頻率均在85％以上 3.完善了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大白菜葉盤