應用Luminex XMAP液相基因芯片技術篩查山東地區(qū)高危人群人乳頭瘤狀病毒基因型.pdf

1、目的： 評價基于Luminex XMAP系統的液相基因芯片技術的檢測靈敏度和特異度及其在女性生殖道人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染檢測中的臨床價值，初步調查山東地區(qū)女性生殖道HPV感染情況及常見HPV基因型。 方法： 1．Luminex XMAP液相基因芯片在人乳頭狀瘤病毒(HPV)DNA檢測中的特異度、靈敏度驗證根據GeraeBank公布的最新的HPV基因組序列，定量配制標準品質粒。在確定優(yōu)化的檢測條件下，應用Lu

2、minex XMAP液相基因芯片各型探針對一系列不同稀釋度標準品(5拷貝/5ul，10拷貝/5ul，20拷貝/5ul，50拷貝/5ul)進行6次重復檢測以確定其檢測靈敏性；對正常人基因組標準品的檢測以確定其檢測特異性。 2．Luminex XMAP液相基因芯片在女性生殖道人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染檢測中的臨床價值評價取福爾馬林固定石蠟包埋宮頸組織標本231例和正常宮頸脫落細胞33例，采用26種基因型液體芯片技術和雜交捕獲(HC

3、)Ⅱ對所有標本進行HPV DNA檢測，比較兩種方法HPV檢測結果的符合情況，對所有不一致標本及HPV單一型感染標本進行基因測序以鑒定液體芯片分型準確性。 3．應用Luminex XMAP液相基因芯片技術篩查山東地區(qū)高危人群人乳頭瘤狀病毒基因型取婦科門診就診者宮頸脫落細胞2925例，采用液相芯片技術進行HPV基因型檢測。639例患者同時做病理診斷，按組織病理學分為細胞學正常組、炎癥組、宮頸上皮內瘤變(C工N)I組、CIN Ⅰ-Ⅱ組

4、、CIN II組、CIN Ⅲ組和宮頸癌組。通過HPV-DNA亞型分布結合病理診斷，分析山東地區(qū)HPV感染基因型與宮頸病變程度的關系。 結果： 1．對于濃度在10拷貝/5ul以及以上的濃度的陽性參比品檢測結果均為陽性，對于濃度為5拷貝/5ul的陽性參比品檢測結果顯示，只有HPV16和HPV18均為陽性，但對于其它24型的陽性參比品的6次平行檢測至少有一次顯示為陰性，因此液相芯片檢測HPV DNA的下限為10拷貝/5ul。

5、Luminex XMAP液相基因芯片對正?；蚪M參比品檢測結果為陰性，特異度和靈敏度均較高。 2．應用液相基因芯片技術和雜交捕獲(HC)Ⅱ對標本進行HPV DNA檢測，兩種方法檢測結果一致性極好(Kappa=0.8889)，正常組、CINⅡ組、CIN Ⅲ組和宮頸癌組Kappa．值依次為1、0.8372、0.6411和0.6540。所有液相芯片檢出的單一型經基因測序驗證準確率為99.00﹪。 3．HPV總感染率36.0﹪(

6、1，054/2，925)，26種基因型檢出23種，按感染率從高到低依次為：HPV-16(26.75﹪)，HPV-52(25.75﹪)，HPV-58(10.47﹪)，HPV-18(8.87﹪)和HPV-11(6.94﹪)等。其中高危型感染占87.32﹪，低危型13.68﹪；單一型感染698例(66.22﹪)，多重感染356例(33.78﹪)，低危型11、6多與高危型多重感染。1054例HPV陽性患者中，261例(24.8﹪)為21-25歲

7、女性，隨年齡增大陽性例數減少，52例(4.9﹪)為51-67歲女性。各病理組HPV陽性率及多重感染率依次為：正常組23.37﹪、4.89﹪，炎癥組33.08﹪、7.14﹪，CIN I組54.54﹪、18.18﹪，CINI-Ⅱ組57.14﹪、28.57﹪，CIN Ⅱ組82.61﹪、41.30﹪，CIN Ⅲ組91.30﹪、43.37﹪，宮頸癌組100﹪、38.46﹪。以組織病理學為確診標準，液相芯片HPV DNA檢測CIN Ⅱ、Ⅲ和宮頸癌的

8、靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值依次為88.57﹪，76.63﹪，68.89﹪．92.16﹪。 結論： 1．在國內率先將Luminex XMAP液相基因芯片技術引入女性生殖道人乳頭狀瘤病毒基因型檢測并對其檢測靈敏度、特異度和臨床價值作出評價。 2.首次對山東地區(qū)高危人群HPV感染情況及常見HPV基因型進行檢測分析，為山東地區(qū)宮頸病變臨床診斷及疫苗研究等提供流行病學資料。 3．所選山東地區(qū)高危人群HP