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1、目的:基因組DNA的非隨機(jī)改變?cè)谝认賹?dǎo)管腺癌(PDAC)的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用,既往研究多局限于以細(xì)胞系為研究對(duì)象,利用BAC探針的array CGH鑒定基因組DNA非隨機(jī)改變。本研究通過寡核苷酸array CGH分析胰腺導(dǎo)管腺癌新鮮組織標(biāo)本,尋找胰腺導(dǎo)管腺癌特異的DNA改變,篩選出可能與胰腺導(dǎo)管腺癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的DNA拷貝數(shù)改變和相應(yīng)的基因。 方法:收集2007年6月至2008年12月PDAC患者手術(shù)切除腫瘤組織標(biāo)本15
2、例,利用顯微切割技術(shù),富集腫瘤細(xì)胞,提取基因組DNA,通過array CGH分析,鑒定PDAC的基因拷貝數(shù)改變。應(yīng)用熒光原位雜交(FISH)和實(shí)時(shí)定量PCR方法驗(yàn)證array CGH的結(jié)果。收集1999年~2008年間手術(shù)切除的PDAC65例,慢性胰腺炎8例,構(gòu)建組織芯片,應(yīng)用免疫組織化學(xué)(IHC)方法檢測(cè)在array CGH中鑒定出的擴(kuò)增基因PSCA和HMGA2的表達(dá)情況,分析其與PDAC臨床病理參數(shù)的關(guān)系。 結(jié)果:Array
3、 CGH結(jié)果中,有11個(gè)增益頻率在80%以上的染色體區(qū)段,分別為:1q31.3、3p22.1、3p22.31、3p22.3、8q24.3、10q11.23、14q12、16p13.3、17q24.1、Xp11.21和Xq28,其中包括畸變頻率>20%的高拷貝擴(kuò)增基因80個(gè)。發(fā)現(xiàn)5個(gè)缺失頻率≥80%的染色體區(qū)段,分別為:5p13.3、12q13.13、17p13.1、17q21.31、Xq11.1,其中包含畸變頻率>20%的缺失基因144
4、個(gè)。Array CGH、FISH和q-PCR實(shí)驗(yàn)均表明8q24.3的PSCA基因擴(kuò)增。IHC結(jié)果提示:PSCA和HMGA2在PDAC中的陽性表達(dá)率分別為67.2%和76.7%。PSCA和HMGA2的表達(dá)與患者年齡、性別、T分期、M分期、分化程度及預(yù)后無相關(guān)性,但均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(PSCA:X2=4.370,P=0.037;HMGA2: X2=13.062,P=1.001)。 結(jié)論:PDAC基因拷貝數(shù)改變頻率高、位點(diǎn)多,PSCA
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