多西環(huán)素對(duì)哮喘大鼠血清IgE、肺組織磷酸化p38的影響.pdf

1、目的:觀察多西環(huán)素對(duì)哮喘大鼠血清IgE、肺組織磷酸化的p38及氣道重塑的影響。建立大鼠哮喘模型，以肺組織中MMP-9、磷酸化的p38，血清中IgE的表達(dá)為檢測(cè)指標(biāo)來(lái)反應(yīng)氣道炎癥反應(yīng)及氣道重塑，通過觀察多西環(huán)素干預(yù)后肺組織中MMP-9、磷酸化的p38，血清中IgE水平的變化，探討多西環(huán)素對(duì)哮喘氣道炎癥和氣道重塑的影響，為臨床哮喘的治療提供新途徑。
　　 方法:清潔級(jí)SD健康雄性大鼠33只，6周齡，體重在50-100g之間，隨機(jī)分為

2、3組，分別為:正常對(duì)照組、哮喘模型組、多西環(huán)素干預(yù)組。哮喘模型組、多西環(huán)素干預(yù)組分別于實(shí)驗(yàn)的第1、8天對(duì)大鼠腹腔注射由卵清蛋白100mg和氫氧化鋁100mg(混于9g/L的鹽水中)配成的混合溶液2ml進(jìn)行致敏，自第15天起將大鼠放置于自制的密閉霧化箱中吸入卵清蛋白溶液，濃度由1％、1.5％、2％、2.5％、3％依次遞增，每4次激發(fā)后增加依次卵清蛋白濃度，每次30分鐘，隔日一次，共激發(fā)20次。對(duì)照組以等量生理鹽水替代，方法同上。多西環(huán)素干

3、預(yù)組在每次激發(fā)前0.5小時(shí)以多西環(huán)素生理鹽水混懸液30mg/kg灌胃給藥。于末次激發(fā)24小時(shí)后麻醉，處死大鼠，取各組大鼠支氣管肺泡灌洗液、血清及肺組織，測(cè)定肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)，ELISA法檢測(cè)血清中IgE水平。部分肺組織行蘇木精-伊紅染色觀察，采用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)測(cè)定支氣管基底膜周徑、總管壁面積、平滑肌面積等反應(yīng)氣道壁厚度的指標(biāo)。免疫組化檢測(cè)各組大鼠肺組織中MMP-9的表達(dá)變化。Western

4、blotting方法測(cè)定肺組織磷酸化的p38的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.哮喘模型的評(píng)價(jià)應(yīng)用卵蛋白致敏和激發(fā)方法，成功建立了大鼠哮喘模型。激發(fā)過程中哮喘組大鼠出現(xiàn)呼吸急促、煩躁不安等表現(xiàn);實(shí)驗(yàn)期間可有精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、體重減輕等情況。
　　 2.肺泡灌洗液細(xì)胞計(jì)數(shù)(×106/L)及分類和正常對(duì)照組（9.42±3.67）細(xì)胞總數(shù)的表達(dá)相比，哮喘組（35.53±7.06）、干預(yù)組的（14.65±5.81）數(shù)量明

5、顯增加，有顯著性差異（F=64.840，P＜0.01）;和正常對(duì)照組（1.24±0.72）嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量相比，哮喘組（4.83±0.65）、干預(yù)組的(2.14±0.58)數(shù)量明顯增加，有顯著性差異(F=96.598，P＜0.01)。
　　 3.各組大鼠氣道重塑指標(biāo)的檢測(cè):
　　 3.1 病理圖像分析氣道管壁厚度（μm2/μm）、平滑肌厚度(m2/μm)分析比較各組大鼠氣道管壁厚度、平滑肌厚度結(jié)果顯示:哮喘組（109.

6、95±13.85）、（56.94±8.23），干預(yù)組（86.37±5.85）、（40.64±4.53）顯著大于正常對(duì)照組（65.47±7.22）、（20.09±6.09），有顯著性差異(F=58.737，P＜0.01)、(F=89.782, P＜0.01)。
　　 3.2 各組大鼠MMP-9的水平:
　　 MMP-9:與正常對(duì)照組（0.24±0.06）相比，哮喘組（0.52±0.06）、干預(yù)組（0.39±0.06）顯著升

7、高，有顯著性差異（F=57.966，P＜0.01）。
　　 4.各組大鼠血清的IgE檢測(cè)(ng/ml):
　　 哮喘組血清IgE水平（229.44±28.34）明顯高于多西環(huán)素組（169.60±57.84），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;而兩組均高于對(duì)照組（99.73±16.16），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=96.90，P＜0.01)。
　　 5.各組大鼠肺組織磷酸化的p38的表達(dá):
　　 結(jié)果顯示哮喘組磷酸化的

8、p38/β-actin水平（0.49±0.01）明顯高于多西環(huán)素組(0.31±0.01)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;兩組均高于對(duì)照組（0.17±0.01），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=60.57，P＜0.01)。p38/β-actin三組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 結(jié)論:多西環(huán)素可減少肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞的數(shù)量，從而減輕氣道炎癥;多西環(huán)素可下調(diào)MMP-9的水平，從而減緩氣道重塑。通過對(duì)血清IgE和肺組織磷酸化的p38的影響