血管生成素-1在低氧環(huán)境下對(duì)人胃癌細(xì)胞侵襲作用的研究.pdf

1、目的：為研究低氧環(huán)境下血管生成素-1（Ang-1）對(duì)人胃癌細(xì)胞中整合素β1（integrinβ1）及uPA表達(dá)的影響，初步研究Ang-1對(duì)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的影響及可能的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)以腺病毒為載體，將Ang-1轉(zhuǎn)染至人胃癌細(xì)胞株BGC-823后，用低氧誘導(dǎo)劑氯化鈷誘導(dǎo)產(chǎn)生低氧環(huán)境，觀察轉(zhuǎn)染了血管生成素1（Ang-1）的人胃癌細(xì)胞在低氧環(huán)境下侵襲能力的改變，并檢測(cè)細(xì)胞integrinβ1及uPA表達(dá)的變化。從而在分子水平初步探討低氧環(huán)境下A

2、ng-1基因?qū)megrinβ1和uPA表達(dá)的影響以及對(duì)胃癌侵襲能力的影響及可能的機(jī)制，進(jìn)而為腫瘤靶向治療策略的選擇提供新的參考依據(jù)。
　　 方法：利用腺病毒作為載體將已構(gòu)建成功的、含Ang-1基因的重組腺病毒（Ad-Ang-1）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞株BGC-823，利用低氧誘導(dǎo)劑氯化鈷進(jìn)行低氧干預(yù)模擬低氧環(huán)境。實(shí)驗(yàn)分組：以Ang-1基因瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后的人胃癌細(xì)胞株BGC-823再行低氧誘導(dǎo)劑干預(yù)的細(xì)胞作為低氧轉(zhuǎn)染組，以單純轉(zhuǎn)染Ang

3、-1基因的胃癌細(xì)胞為單純轉(zhuǎn)染組，以單純低氧誘導(dǎo)劑氯化鈷干預(yù)的胃癌細(xì)胞為單純低氧組，以未轉(zhuǎn)染未低氧干預(yù)的正常胃癌細(xì)胞作為空白對(duì)照組，采用Transwell小室行侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的侵襲能力。利用半定量RT-PCR，免疫細(xì)胞化學(xué)和Western blot方法對(duì)四組細(xì)胞中integrinβ1及uPA的mRNA和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果： RT-PCR結(jié)果顯示integrinβ1及uPA的mRNA的表達(dá)在單純低氧干預(yù)組較空白對(duì)照

4、組有所上調(diào)，而低氧轉(zhuǎn)染組要明顯高于對(duì)照組及空白組（P<0.05），單純低氧組及單純轉(zhuǎn)染組相比較無(wú)明顯差異（P>0.05）；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)integrinβ1及uPA的蛋白的表達(dá)在單純低氧干預(yù)組較空白對(duì)照組表達(dá)上調(diào)，而低氧轉(zhuǎn)染組中要明顯高于對(duì)照組及空白組（P<0.05），單純低氧組及單純轉(zhuǎn)染組相比較無(wú)明顯差異（P>0.05）；Western blot檢測(cè)integrinβ1及uPA的蛋白的表達(dá)顯示單純低氧干預(yù)組較空白對(duì)照組要明顯上調(diào)，而

5、低氧轉(zhuǎn)染組較對(duì)照組及空白組表達(dá)均明顯上調(diào)（P<0.05），單純低氧組及單純轉(zhuǎn)染組比較無(wú)明顯差異（P>0.05）；Transwell小室結(jié)果顯示單純低氧組細(xì)胞侵襲能力較空白對(duì)照組提高，而低氧轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力與其他三組比較均明顯提高，差異有顯著性（P<0.05），單純低氧組及單純轉(zhuǎn)染組相比較無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：低氧干預(yù)后人胃癌細(xì)胞侵襲力提高，而低氧干預(yù)Ad-Ang-1轉(zhuǎn)染后的腫瘤細(xì)胞其侵襲能力較單純低氧