納米孔道內(nèi)TATA結(jié)合蛋白的檢測(cè)及其與DNA相互作用的研究.pdf

1、細(xì)胞膜上生物孔道的開關(guān)對(duì)許多生物基礎(chǔ)功能起著決定性的作用，受生物孔道啟發(fā)的納米孔道平臺(tái)的研究，也在近年取得了突飛猛進(jìn)的成果。分子科學(xué)和納米技術(shù)的不斷革新，也使我們有了更多的手段去探尋這一神奇的科學(xué)領(lǐng)域?；诩{米孔道構(gòu)筑的DNA探針系統(tǒng)在生物傳感和門控方面都有著明顯的優(yōu)勢(shì)，它不僅可以作為一個(gè)有效的檢測(cè)平臺(tái)對(duì)靶標(biāo)分子進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)，還能作為傳感原件被應(yīng)用在生物過程的研究當(dāng)中。本文的工作主要包括以下兩個(gè)方面：
　　1.對(duì)轉(zhuǎn)錄因子的檢測(cè)在

2、監(jiān)控細(xì)胞傳代過程中起著重要的作用。但是，傳統(tǒng)方法能夠達(dá)到的檢測(cè)限和實(shí)際需求之間依然存在著很大的差距?；?DNA探針體系構(gòu)筑的納米孔道對(duì)轉(zhuǎn)錄因子TATA結(jié)合蛋白（TATA Binding Protein,TBP）進(jìn)行檢測(cè)。將帶有TATA盒序列的探針修飾在納米孔道中，通過該位點(diǎn)與TBP的特異性結(jié)合對(duì)TBP進(jìn)行識(shí)別檢測(cè)。該方法具有顯著高于先前工作的靈敏度（檢測(cè)限達(dá)到1pM），在高濃度干擾物的存在下，該方法依然具有良好的特異性。
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3、.在細(xì)胞內(nèi)DNA和蛋白的結(jié)合通常都發(fā)生在十分擁擠的內(nèi)環(huán)境中，靶標(biāo)蛋白和 DNA通常都處于各種無關(guān)物質(zhì)的包圍之中，它們的運(yùn)動(dòng)范圍都非常有限。為了研究這一實(shí)際情況下 DNA和蛋白的結(jié)合情況，我們?cè)O(shè)計(jì)了一種討論 DNA-蛋白結(jié)合影響因素的方法。該方法包括1條DNA探針序列和6條與之相關(guān)的邏輯序列，利用位點(diǎn)錯(cuò)配和序列差異，我分別在序列上設(shè)計(jì)了1-2個(gè)蛋白結(jié)合位點(diǎn)，并將這些序列用化學(xué)修飾法固定在納米孔中。利用TBP作為模型蛋白，分別討論它們對(duì)TB