MMP-9在人動脈硬化組織中表達及影響因素探討.pdf

1、研究目的：動脈硬化發(fā)生、發(fā)展是復雜并受多種因素影響的慢性過程。病人病情穩(wěn)定與否不僅與動脈硬化管腔狹窄程度有關，與斑塊炎癥是否活躍更密切相關。炎性細胞和細胞因子參與動脈硬化斑塊變化的病理過程?；|金屬蛋白酶9(MatrixMetalloProteinase—9 MMP—9)在動脈粥樣硬化形成過程中起到了重要作用，MMP—9降解膠原，減弱動脈粥樣硬化斑塊中纖維帽強度，導致了斑塊不穩(wěn)定性增加，從而促進急性冠脈綜合癥等的發(fā)病。本項研究觀察基質金

2、屬蛋白酶9在人動脈硬化組織中的表達，探討胰島素樣生長因子(IGF—1)、腫瘤壞死因子(TNF—α)、白介素1βB(IL—1β)、單核細胞趨化因子—1(MCP—1)及他汀藥物對其表達的影響。
　　 研究方法：動脈硬化組織取自擇期開放外科手術標本，術后病理檢查證實為動脈硬化組織。對照組動脈標本取自非正常死亡成人標本，經大體和鏡下病理檢查證實為正常主動組織。所有標本4％多聚甲醛固定12h，常規(guī)脫水，石蠟包埋切片。HE染色及標準免疫組織

3、化學染色檢測。
　　 人血管平滑肌細胞取自外科開放手術標本，細胞的分離、培養(yǎng)、收集、凍存、復蘇，以RT—PCR和Western blot技術測定不同濃度TNF—α誘導下血管平滑肌細胞中MMP—9 mRNA和蛋白的表達；不同濃度匹伐他汀對TNF—α的干預作用。
　　 免疫組織化學結果判斷：由兩位以上病理醫(yī)師采用雙盲法觀察每張切片。判定陽性反應依據：按光鏡下(×400)隨機選10個不重復視野，按陽性細胞百分率評分：<25％定

4、為陰性(0分)，26％～50％定為弱陽性(1分)，51％—75％定為中度陽性(2分)，>76％—100％為強陽性(3分)。
　　 RT—PCR判斷方法：紫外線燈下觀察照相，同時出現內參及目的基因條帶為陽性。僅出現內參者為陰性。掃描儀進行灰度掃描，Image Tool Version2．0軟件分析結果。
　　 Western blot檢測判斷方法：掃描儀進行灰度掃描，Image Tool Version2．0軟件分析結果，

5、以各檢測蛋白和β—actin掃描灰度的比值作為評價各蛋白表達水平的指標。
　　 結果：正常腹主動脈壁內未見明顯MMP—9、MCP—1、IL—1β分布，TNF—α、IGF—1染色呈陽性或弱陽性；動脈硬化組織中MMP—9主要分布在動脈壁中膜、外膜炎細胞浸潤區(qū)，呈片狀或連續(xù)分布，MCP—1出現在排列紊亂的炎性細胞聚集處，陽性細胞多為成纖維細胞、巨噬細胞；IGF—1在動脈硬化組織中染色呈弱陽性或陰性，淺棕黃色陽性染色偶見于散在分布的血管

6、平滑肌細胞內。IL—1βTNF—α在正常主動脈無強陽性表達，偶有淺棕黃色染色分布于血管平滑肌細胞中，在動脈粥樣硬化組織中分布主要位于血管內皮細胞及增生的血管平滑肌細胞內。TNF—α分布主要位于血管中膜、外膜，及血管壁中的巨噬細胞等炎性細胞浸潤區(qū)域。MMP—9分布與MCP—1、TNF—α、IL—1β分布呈正相關，與IGF—1蛋白表達呈負相關；分布有顯著或極顯著差異。
　　 TNF—α呈濃度依賴方式(1/10/100ng/ml)增加

7、血管平滑肌細胞MMP—9 mRNA和蛋白的表達，統(tǒng)計學差異顯著(P<0．01)。不同濃度匹伐他汀(0．1、1、10、100、500nm)可拮抗TNF—α(100ng/ml)促血管平滑肌細胞MMP—9 mRNA和蛋白的表達，差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0．01)。
　　 結論：人動脈硬化組織中均有MMP—9、TNF—α、MCP—1、IGF—1、IL—1β的表達，但分布不同；TNF—α增加血管平滑肌細胞MMP—9的表達，匹伐他汀可拮抗