糖智寧膠囊抗糖尿病記憶障礙藥效及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：糖尿病是血液中胰島素分泌不足導(dǎo)致高血糖及尿糖、伴隨碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)急性代謝紊亂的疾病，并可引起微血管和周圍神經(jīng)等諸多病變，例如神經(jīng)、心血管、腎臟和眼等多器官慢性損傷與功能衰竭，進(jìn)而引發(fā)酮癥酸中毒等急性并發(fā)癥，但該病還可造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害，該損傷卻一直未引起人們的重視。本課題研究是在臨床療效明確的前提下，結(jié)合處方中藥物成分的性質(zhì)，制定出質(zhì)量評(píng)價(jià)研究、探討藥物在早期干預(yù)認(rèn)知功能障礙方面的作用和意義并證明藥效、探索機(jī)理。

2、>　　方法：1、在質(zhì)量評(píng)價(jià)研究中，采用薄層色譜法對(duì)處方中葛根、珠子參、黃連進(jìn)行了定性鑒別；采用HPLC法對(duì)糖智寧膠囊中的葛根素、鹽酸小檗堿、人參皂苷Ro、竹節(jié)參皂苷Ⅳa進(jìn)行了含量測(cè)定，完善了糖智寧膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。2、進(jìn)行了糖智寧的急性毒性研究，確定了安全的臨床用量。在對(duì)糖智寧膠囊抗糖尿病記憶障礙作用及機(jī)制研究中，采用腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病模型，通過(guò)對(duì)血糖的測(cè)定，觀察糖智寧膠囊對(duì)糖尿病大鼠血糖的影響；水迷宮訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)考查糖智寧膠囊對(duì)糖

3、尿病大鼠記憶障礙的影響；訓(xùn)練結(jié)束后部分大鼠左心室灌注4%多聚甲醛，將全腦作冠狀石蠟切片，用于HE染色觀察海馬組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變，免疫組化方法觀察海馬組織中Glu、GABA的含量；部分大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉后，腹腔取血頸椎脫臼法處死大鼠，迅速開(kāi)顱取出大腦組織，快速剝離海馬組織放入液氮中迅速冷凍后，用于Western blot實(shí)驗(yàn)觀察海馬組織中EAAC1、GAD、NR1、NR2A和NR2B蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、在質(zhì)量評(píng)

4、價(jià)研究中，建立了葛根、黃連、珠子參的薄層色譜鑒別方法；HPLC法同時(shí)測(cè)定三批糖智寧膠囊中葛根素、鹽酸小檗堿、人參皂苷 Ro和竹節(jié)參皂苷Ⅳa的平均含量分別為33.16mg/粒、31.36mg/粒、56.92mg/粒、29.12mg/粒。2、在降糖抗記憶障礙試驗(yàn)中，采用鏈脲佐菌素成功建立糖尿病模型，血糖測(cè)試結(jié)果顯示：模型組糖尿病大鼠的血糖與正常對(duì)照組比明顯升高，具有顯著性差異（P＜0.01），糖智寧膠囊0.47g/kg、0.94g/kg、1

5、.4g/kg劑量組大鼠血糖在給藥后，血糖明顯降低，較模型組有顯著差異（P＜0.05），糖智寧膠囊HE結(jié)果顯示模型組海馬組織病理形態(tài)異常，錐體細(xì)胞排列紊亂，脫顆粒現(xiàn)象，少數(shù)細(xì)胞表現(xiàn)不規(guī)則形的變性壞死區(qū)域；糖智寧膠囊治療組大鼠海馬組織病變性質(zhì)較模型組減輕，其錐體細(xì)胞數(shù)量明顯較多，排列整齊，形態(tài)無(wú)較大改變，著色正常；免疫組化結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組海馬組織中GABA的表達(dá)面積和強(qiáng)度明顯降低，糖智寧膠囊治療組 GABA的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于模

6、型組（P<0.01）；各組Glu的表達(dá)與正常組比較明顯升高；Western-blot結(jié)果顯示：模型組海馬中 GAD、EAAC1的蛋白表達(dá)明顯低于正常組（P<0.01），糖智寧膠囊治療組0.94g/kg大鼠海馬組織中GAD、EAAC1的蛋白表達(dá)與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），糖智寧膠囊治療組1.4g/kg大鼠海馬組織中GAD、EAAC1的蛋白表達(dá)與模型組比較有顯著性差異（P<0.01）；模型組海馬中NR1的蛋白表達(dá)明顯低于正常組

7、（P<0.01）；NR2A蛋白的表達(dá)各組間無(wú)顯著性差異；NR2B蛋白的表達(dá)與正常組比較有差異（P<0.05）；糖智寧膠囊治療組0.94g/kg、1.40g/kg大鼠海馬組織中NR1、NR2B的蛋白表達(dá)與模型組比較有顯著性差異（P<0.01）。
　　結(jié)論：1、優(yōu)化葛根、黃連、珠子參的薄層色譜鑒別方法分離度好、斑點(diǎn)清晰、專屬性強(qiáng)；HPLC同時(shí)測(cè)定糖智寧膠囊中葛根素、鹽酸小檗堿、人參皂苷Ro和竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，線性、精